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Ca^<2+>カルモデュリン依存性プロテインキナーゼIIの分子的多様性の解析

Ca^2+钙调蛋白依赖性蛋白激酶II分子多样性分析

基本信息

批准号：
05780451
负责人：
竹内昌之
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Asahikawa Medical College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

Ca^<2+>/カルモデュリン依存性プロテインキナーゼII(キナ-ザII)の分子的多様性を解析するために、まず、ウサギの肝臓から抽出したRNAを用いて、cDNAライブラリーを作製した。このcDNAライブラリーから、既に得られているキナ-ザIIgamma′のcDNAをプローブに用いて、ポジテイブクローンC5を得た。このクローンC5の塩基配列を解析した結果、クローンC5は、gamma′と同じ塩基配列であるが、gamma′には存在しない69ヌクレオチドの塩基配列が挿入されており、新たなアイソフオームgamma′2であることが判明した。このgamma′2で挿入されている配列は、アイソフオーム間で、アミノ酸配列が変化している領域である、D-regionの中のD2領域に位置していた。このgamma′2のD2領域の23アミノ酸残基からなる配列は、gammaのD2領域の11アミノ酸残基からなる配列と相同性が低く、他のアイソフオームalpha,deltaのD2領域の配列と非常に相同性が高かつた。この結果より、gammaタイプのアイソフオームには、gammaに存在するD2aと、gamma′2に存在するD2bの、2種類のD2領域が存在していえる事が明らかになつた。このD2領域の異なるgammaタイプのアイソフオームが、RNAのスプライシングの違いにより生成されたものであるのか、或は、異なる遺伝子に由来するものであるのかを、解析するために、ウサギの染色体DNAについて、サザンハイブリダイゼ-シュン法が分析を行つた。その結果、gammaの遺伝子は、ゲノム中に、1個しか存在しないことが判明し、種々のgammaタイプのアイソフオームが、RNAのスプライシングの違いにより、生成することが明らかになつた。また、ウサギの肝臓のRNAより作製したcDNAを試料に用いて、PCR法により、gammaタイプのアイソフオームの解析を行い、肝臓では、gamma′1、gamma′2がほぼ同じ程度に生成されている事が判明した。

Ca^<2+>/ The cDNA of this gene was obtained from C5. The analysis results of the base alignment of C5 show that the base alignment of C5 is different from that of gamma ′ and gamma′. The gamma '2 region is located in the D2 region, and the gamma' 2 region is located in the D2 region. The alignment of 23 amino acid residues in the gamma′2 domain and the alignment of 11 amino acid residues in the gamma ′ 2 domain are low in identity, and the alignment of alpha and delta in the D2 domain is high in identity. As a result, gamma fields exist in D2a and D2 b, and gamma fields exist in D2b and D2 fields. This D2 domain of gamma profile analysis, RNA profile analysis, RNA profile analysis, DNA profile analysis, RNA profile analysis, DNA profile analysis, DNA profile analysis, DNA As a result, the gamma gene is present in the middle of the gene pool, and the gamma gene is present in the middle of the gene pool. In addition, the RNA production of the liver and the cDNA production of the liver were analyzed by PCR and the production of the liver and the gamma′1 and gamma′2 in the same degree.