Ca^<2+>/カルモデュリン依存性プロテインキナーゼIIの分子的多様性の解析

Ca^2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II分子多样性分析

• 批准号: 06780493
• 负责人: 竹内 昌之
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Asahikawa Medical College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06780493/
• 关键词: プロテインキナーゼ; カルシウムイオン; カルモデュリン; アイソザイム

Ca^<2+>/カルモデュリン依存性プロテインキナーゼII(キナーゼII)の分子的多様性を解析するために、ウサギの肝臓から抽出したRNAを試料に用いて、逆転写酵素によりcDNAを作製し、RT-PCR法により、キナーゼIIγタイプのアイソフォームの解析を行った。アイソフォーム間で変化している領域である、D-領域に関して、その5'上流側、3'下流側、及び、D-領域内部の塩基配列に対応する合成オリゴヌクレオチドを、プライマーに用いて、PCR法で解析した。D-領域の5'上流側と3'下流側の合成オリゴヌクレオチドを、プライマーに用いて、D-領域全体を増幅したところ、ポリアクリルアミドゲル電気泳動で、161bpと230bpの2本のバンドが検出された。この2種類のDNA断片の塩基配列を解析し、これらが、アイソフォームγ'1、γ'2であることが確認された。5'上流側とD2a領域内部の合成オリゴヌクレオチドを、プライマーにして、PCR法を行ったところ、110bpのDNA断片が検出された。また、D2a領域内部と3'下流側の合成オリゴヌクレオチドのプライマーの組合せで、PCR法によりDNA断片を増幅すると。108bpと177bpのDNA断片が検出された。これらのDNA断片の塩基配列を解析した結果、新規のアイソフォームとして、γ'3、γ'4の2種類を発見した。更に、遺伝子上でのD2a領域とD2b領域の配列順序を決定するために、この2種類の領域内部の塩基配列に対応する合成オリゴヌクレオチドを、プライマーに用いて、ウサギの染色体DNAについて、PCR法で解析した。その結果、2つの領域はイントロンで隔てられた独立したエクソンとして存在しており、D2a領域が5'上流側にD2b領域が3'下流側に位置することが判明した。

Analysis of molecular diversity of Ca <2+>/Ca2 +-dependent proteins, RNA extraction, reverse transcription of enzyme cDNA, RT-PCR and analysis of Ca2 +-dependent proteins. The analysis was performed by PCR method and the synthesis was carried out for the base alignment in the 5'upstream side, 3' downstream side, and 3 'downstream side of the D-domain. D-domain 5'upstream side and 3' downstream side of the synthesis, the use of the D-domain as a whole to increase the amplitude of the D-domain, the D-domain as a whole to increase the amplitude of the D- These two types of DNA fragments were analyzed and identified. The DNA fragment of 110bp was detected by PCR. DNA fragments were amplified by PCR and synthesized in the 3'downstream side of D2a domain. DNA fragments of 108bp and 177bp were detected. The results of DNA fragment alignment analysis showed that two new types of DNA fragments, γ'3 and γ'4, were identified. In addition, the sequence of D2a and D2b domains on the gene was determined. The sequence of D2a and D2b domains was determined by PCR analysis. As a result, 2 fields are separated from each other and independent of each other. It is clear that D2a field is 5'upstream and D2b field is 3' downstream.

项目成果

Masayuki Takeuchi: "Coutact Transfer Method:DNA Transfer from Polyacrylamide Gd" Analytical Biochemistry. 224. 611-612 (1995)

Masayuki Takeuchi：“Coutact 转移方法：从聚丙烯酰胺 Gd 转移 DNA”分析生物化学。