新しい超高感度抗ミトコンドリア抗体測定法の開発とその応用

新型超灵敏抗线粒体抗体测定方法的研制及其应用

• 批准号: 05857020
• 负责人: 廣田 晃一
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: National Institute of Health and Nutrition
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05857020/
• 关键词: 抗ミトコンドリア抗体; 酵素免疫測定法; 原発性胆汁性肝硬変症

2,4-Dinitrophenylated lipoate acetyltansferase(DNP標識抗原)およびbeta-galactosidase(E.coli)-labeled lipoate acetyltransferase(酵素標識抗原)をチオール基とマレイミド基を利用した申請者ら独自の方法により調整した。これらを用いて申請者らの開発した免疫複合体転移酵素免疫測定法による抗ミトコンドリア抗体の測定を行った。すなわち(1)DNP標識抗原、酵素標識抗原および被検抗体の3者からなる免疫複合体を形成させ、これを抗DNP抗体不溶化固相上にトラップした。(2)固相を洗浄した後、DNP-リジンにより複合体を溶出すると同時に抗イムノグロブリン抗体不溶化固相にトラップした(転移)。(3)最後に抗イムノグロブリン抗体不溶化固相上の酵素活性を蛍光基質を用いて測定した。高い抗体価を持つ原発性胆汁性肝硬変症患者血清を用いて従来法との比較を行ったところ、従来法に比べて10〜30倍の高感度化が達成された。この方法を用いて、多数の原発性胆汁性肝硬変症患者及び健常者血清中から抗ミトコンドリア抗体の検索を行った。健常者血清からは抗ミトコンドリア抗体は検出されなかった。また殆どの原発性胆汁性肝硬変症患者血清から抗ミトコンドリア抗体を検出した。今後抗原標識法の改良などを行ってより感度を高めていくと共に、抗ミトコンドリア抗体と反応する別の抗原についても検討する予定である。

2, 4-dinitrophenylated lipoate acetyltansferase(DNP-labeled antigen)およびbeta-galactosidase(E.coli)-labeled lipoate Identify antigen acetyltransferase (enzyme) を チ オ ー ル base と マ レ イ ミ ド base を using し た applicants ら の way alone に よ り adjustment し た. こ れ ら を with い て applicants ら の open 発 し た immune complex planning shift enzyme immunoassay に よ る resistance ミ ト コ ン ド リ ア antibody の line measurement を っ た. DNP す な わ ち (1) identify antigens, enzymes identify antigen お よ び by 検 antibody の 3 か ら な る immune complex を form さ せ, こ れ を DNP antibody not melt resistance on the solid phase に ト ラ ッ プ し た. Incorporated (2) solid phase を し た, DNP - リ ジ ン に よ り complex を dissolution す る と resistance at the same time に イ ム ノ グ ロ ブ リ ン antibody not melt solid-phase に ト ラ ッ プ し た (planning). (3) Finally, the に anti-<s:1> ムノグロブリ <s:1> antibody does not dissolve the czyme activity on the solid phase を蛍 photomatrix を is used to determine the <s:1> た. High い antibody 価 を hold つ former 発 sexual biliary cirrhosis - patients serum を い て 従 to method と の line more を っ た と こ ろ, 従 to に than べ て 10 ~ 30 times の Gao Gan degree melts が reached さ れ た. こ の way を with い て, most original 発 の bile in patients with liver disease of hard - and び health often serum か ら resistance ミ ト コ ン ド リ ア antibody の 検 cable line を っ た. In the serum of healthy individuals, <s:1> ら <e:1> anti-ト コ トコ ドリア ドリア antibodies are produced 検 検 and されな った った. In the serum of patients with また almost <e:1> primary biliary cirrhosis, ら ら anti-<s:1> トコ ドリア ドリア antibodies を検 are released, た た. Future antigen identification method of modified な の ど を line っ て よ り sensitivity high を め て い く と に, anti ミ ト コ ン ド リ と ア antibody against 応 す る don't の antigen に つ い て も beg す 検 る designated で あ る.