全身性硬化症におけるトポイソメラーゼIに対する自己免疫応答の解明-クラスIIHLAと抗原提示細胞の役割-

阐明系统性硬化症中拓扑异构酶 I 的自身免疫反应 - II 类 HLA 和抗原呈递细胞的作用 -

基本信息

批准号：
05857057
负责人：
桑名正隆
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究ではT細胞の主要組織適応抗原(MHC)を介した抗原組織の段階での自己抗体(抗DNAトポイソメラーゼI抗体:抗topo I抗体)産生の役割を明らかにするため、精製したtopo Iを用いて全身性硬化症(強皮症)患者および健常人末梢血単核球(PBMC)を刺激し、その反応をリンパ球の増殖により判定した。cDNA断片より発現させることにより得られた、5つのoverlapしてtopo Iの全塩基配列をコードする融合蛋白を抗原として用いた。抗topo I抗体陽性患者のPBMCはtopo Iにより著名な増殖反応を示し(stimulation index 5〜25)、モノクローナル抗体による抑制試験により反応を示したのはCD4^+T細胞が主であった。またこの反応はHLA‐DR抗原により拘束されていた。ほとんどの抗topo I抗体陰性強皮症患者と健常人のPBMCはtopo Iに反応しなかったが、抗topo I抗体と関連するHLA‐DR遺伝子(DRB1^*1502またはDRB1^*1104)をもった例では軽度の反応を示した(stimulation index3‐6)。5つのtopo I融合蛋白を用いたリンパ球増殖試験では、topo I分子上に少なくとも3つの独立したT細胞エピトープが存在し、全例が認識するT細胞エピトープは、以前申請者が明らかにした主要なB細胞エピトープとは異なった。またT細胞エピトープの分布とHLA‐DRおよびDQ遺伝子が密接に関連していた。これらの成績は、強皮症患者における抗topo I抗体はtopo I分子そのものの抗原刺激によって産生され、その産生はT細胞とMHCにより制御されていることを示唆する。現在抗topo I抗体陽性強皮症患者のPBMCより、topo Iと反応するT細胞を分離することに成功し,さらに詳細な分析を行っている。

在这项研究中，为了阐明自身抗体（抗DNA拓扑异构酶I抗体：抗topo I抗体）生产在抗原组织阶段通过T细胞的主要组织适应抗原（MHC）在抗原组织阶段中的作用，纯化的topo I用于刺激外围血液单核细胞（PBMC）的患者（pbmc），刺激了系统共），刺激了系统共（pbmc），刺激了pbmc的患者（pbmc）（pbmc），该细胞（coder）（pbmc）（pbmc）（pbmc）（scra）通过淋巴细胞增殖确定反应。通过表达cDNA片段和编码托普托的整个碱基序列获得的融合蛋白被用作抗原。抗topo I抗体阳性患者的PBMC显示出由于TOPO I（刺激指数5-25）引起的明显增生反应，而CD4^+T细胞是通过单氯隆抗体的抑制测试表现出的反应。该反应也受HLA-DR抗原的约束。尽管大多数抗topo I抗体阴性硬皮病患者和健康个体对TOPO I没有反应，但与抗topo I抗体有关的HLA-DR基因患者（DRB1^*1502或DRB1^*1104）显示了轻度的反应（刺激指数3-6）。在使用五种TOPO I融合蛋白的淋巴细胞增殖研究中，至少存在三个独立的T细胞表位，并在托型I分子的顶部存在，所有识别的T细胞表位与先前由申请人揭示的主要B细胞表位不同。此外，T细胞表位的分布与HLA-DR和DQ基因密切相关。这些结果表明，硬皮病患者中的抗topo I抗体是通过抗原I分子本身的抗原刺激而产生的，并且该产生受T细胞和MHC的调节。目前，我们已经成功地分离出与抗topo I抗体阳性硬皮病患者的PBMC与TOPO I反应的T细胞，并正在进行进一步的详细分析。