口蓋粘膜瘢痕組織の拘縮制御に関する生化学的研究

腭粘膜疤痕组织挛缩控制的生化研究

基本信息

批准号：
05857239
负责人：
須佐美隆史
金额：
$ 0.58万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至 1994
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05857239/
关键词：
口蓋粘膜瘢痕組織線維芽細胞細胞骨格アクチンデスミン TGF-beta PDGF

项目摘要

実験には8週齢雄性SD系ラットを用い、その口蓋粘膜を切除後、10日、2週、3週、4週に形成された瘢痕組織について検討を加えた。まず組織を10%ホルムアルデヒドで固定し、EDTAにて脱灰後、パラフィン切片を作製した。その後、抗デスミン抗体による免疫組織染色を行い、瘢痕組織の線維芽細胞におけるデスミンの発現の有無を検討した。その結果、血管平滑筋および将来血管壁を構成するであろう幼弱な組織の細胞にはデスミンの発現は認められたが、瘢痕組織中の線維芽細胞には認められなかった。また、切除後4週経過した瘢痕組織より分離培養した線維芽細胞にも同抗体による染色を行ったが、こちらもデスミンの発現は認められなかった。次に、正常粘膜から分離培養した線維芽細胞を用いて、TGF-beta1およびPDGFを作用させ、ロ-ダミンファロイジン染色により、ストレスファイバーなどアクチン系細胞骨格の変化を観察した。その結果、TGF-beta1ではほとんど変化がみられなかったが、PDGFでは細胞形態が変化し、ストレスファイバーの増加が認められた。DNAsel活性阻害法においても同様にPDGFによるアクチン重合度の上昇が認められた。しかし、ノーザンブロット分析では、TGF-beta1によるbetaおよびgammaアクチンのmRNAレベルでの上昇が認められたが、PDGFを作用させても変化は認められなかった。以上のことより、瘢痕組織中および瘢痕組織由来の線維芽細胞では、アクチン系細胞骨格に特異的変化が認められたものの、中間径線維、特にデスミンに関しては変化が認められなかった。また、アクチン系細胞骨格の特異的変化の発現機序についても、単一因子ではなく複数の因子が関与していることが示唆された。

使用8周大的雄性SD大鼠进行了实验，并去除了口感粘膜后，检查了在10天，2、3周和4周时形成的疤痕组织。首先，用10％甲醛固定组织，用EDTA脱钙，并制备石蜡切片。之后，用抗脱敏抗体进行免疫组织化学染色，以确定在疤痕组织的成纤维细胞中是否表达脱木素。结果，在血管平滑肌的细胞和造成的组织中观察到脱敏表达，这些组织将来会构成血管壁，但在疤痕组织中的成纤维细胞中不存在。此外，切除后4周与疤痕组织分离和培养的成纤维细胞也用相同的抗体染色，但也没有观察到脱敏表达。接下来，使用与正常粘膜分离并培养的成纤维细胞与TGF-BETA1和PDGF一起起作用，并使用Rhodamine phalloidin染色来观察肌动蛋白细胞骨架（例如应激纤维）的变化。结果，TGF-BETA1几乎没有变化，但是PDGF中的细胞形态发生了变化，并且观察到应力纤维的增加。类似地，由于DNASEL活性抑制方法中的PDGF，肌动蛋白聚合的程度也增加了。但是，北印迹分析表明，TGF-BETA1增加了β和伽马肌动蛋白的mRNA水平，但是当应用PDGF时未观察到变化。结果，在疤痕组织中的肌动蛋白细胞骨架和源自疤痕组织的成纤维细胞中观察到了特定的变化，但是在中间纤维，尤其是脱发的中间纤维中未观察到变化。还建议在肌动蛋白细胞骨架表达表达的机理中涉及多个因素，而不是单个因素。