生きた細胞が見えるレーザー蛍光偏光解消顕微鏡の開発と細胞動態解析への応用

开发可观察活细胞的激光荧光去偏显微镜及其在细胞动力学分析中的应用

• 批准号: 06772134
• 负责人: 小澤 孝一郎
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06772134/
• 关键词: 蛍光偏光解消顕微ビデオシステム; 蛍光偏光解消現象; プロテインキナーゼC; RBL-2H3細胞; 細胞内動態解析; Fim-1

蛍光偏光解消顕微鏡の開発とその細胞動態解析への応用を試み、以下の実績を得た。1.蛍光偏光解消顕微鏡-ビデオシステムの開発蛍光の偏光解消度を細胞レベルで解析することを目的とし、顕微鏡、偏光板、超高感度SITカメラ、高画質業務用ビデオデッキ、コンピューター画像解析装置を組み合わせて、蛍光偏光解消顕微鏡-ビデオシステムを開発した。2.蛍光標識抗プロテインキナーゼC抗体の作製蛍光色素ロ-ダミンを結合させた抗プロテインキナーゼC抗体を作製・精製し、これをラット肥満細胞系であるRBL-2H3細胞内へマイクロインジェクトし、上記(1)のシステムを用い観察を行ったが、プロテインキナーゼCに由来する蛍光の偏光解消現象は観察されなかったため、現在、抗プロテインキナーゼC抗体の別な位置に蛍光物質を結合させることを進めている。3.新規蛍光物質(Fim-1)を用いた細胞内プロテインキナーゼCの動態解析プロテインキナーゼCを特異的に蛍光標識する新規蛍光化合物(Fim-1)を入手し、これをRBL-2H3細胞内にマイクロインジェクトし、上記(1)のシステムで解析した結果、生きた細胞でのプロテインキナーゼCの細胞内動態の解析に成功した。また、得られた結果は、固定細胞を用いた蛍光免疫組織化学的手法による結果と非常によく一致していた。(Neurochem.Res.in press;J.Cell.Biol.投稿準備中)。4.RBL-2H3細胞におけるプロテインキナーゼCの機能解析プロテインキナーゼCγをRBL-2H3細胞内にマイクロインジェクトした結果、プロテインキナーゼCγは他のプロテインキナーゼCアイソザイムの働きを特異的に抑制し、その結果プロテインキナーゼCβあるいはδによる開口放出を阻害することを発見した(Molecular Biology of the Cell 5,474-484(1994); Neurochem.Res.19,877-(1994))。

The use of polarized light-eliminating microscopy for dynamic analysis of cells has been tested, and the following results have been obtained. 1. Polarized polarizing de-eliminating micromirror - ビデオシステムの开発蛍光のpolarizing de-eliminating degree をcell レベルでanalytical purposeすることをpurposeとし, とmicroscope, polarizing plate, ultra-high sensitivity S IT カメラ, high-definition business use ビデオデッキ, コンピューター image analysis equipment Set を combination of み わ せ て, 荍optical polarizing solution elimination micromirror - ビデオシステムを开発した. 2. Production of anti-Hydrochrome-labeled anti-Hydrochrome C antibody Antibody production and purification, これをラット満 cell line であるRBL-2H3 intracellular へマイクロインジェクトし, on Note (1) The origin of the のシステムを用い観看を行ったが, プロテインキナーゼCにする荍光のpolarized light solution phenomenon は観看されなかったため, present, anti-プロテインキナーゼC antibody のdifferent な position に蛍光MATをcombination させることを入めている. 3. The new regulation of light substance (Fim-1) is used for dynamic analysis of intracellular light source.ロテインキナーゼCをSpecial に荍光 mark and するNew regulation に荍光Compound (Fim-1)をStartし, これをRBL-2H3 intracellular にマイクロインジェクトし, above (1) のシステムでThe results of the analysis and the analysis of the intracellular dynamics of the cells were successfully analyzed. The results were obtained using the method of photoimmunohistochemistry of fixed cells, and the results were very consistent. (Neurochem. Res. in press; J. Cell. Biol. In preparation for submission). 4.Functional analysis of RBL-2H3 cell lines and cells CγをRBL-2H3 intracellular にマイクロインジェクトした results, プロテインキナーゼCγはのプロテインキナーゼCアイソザイムの働きをSpecific に inhibiting し、そのRESULT プロテインMolecular Biology of the Cell 5,474-484(1994); Neurochem. Res. 19,877-(1994)).

项目成果

Koichiro Ozawa: "Real-time analysis of exocytosis and PKC-translocation in RBL-2H3 cells visualized by video-enhanced light/fluorescence microscopy." Neurochemical Research. (in press). (1995)

Koichiro Ozawa：“通过视频增强光/荧光显微镜可视化 RBL-2H3 细胞中的胞吐作用和 PKC 易位的实时分析。”

小澤孝一郎: "神経伝達物質受容体(ヒスタミン受容体)" 廣川書店, 207 (1994)

小泽晃一郎：“神经递质受体（组胺受体）”广川书店，207（1994）

Koichiro Ozawa: "Studies with transfected and permeabilized RBL-2H3 cells reveal unique inhibitory properties of protein kinase C-gamma." Molecular Biology of the Cell. 5. 475-484 (1994)

Koichiro Ozawa：“对转染和透化 RBL-2H3 细胞的研究揭示了蛋白激酶 C-gamma 的独特抑制特性。”

Koichiro Ozawa: "Studies on the role of phospholipase D and protein kinase C in the exocytotic response of a rat mast cell(RBL-2H3)line to Ca ionophore,A23187." Journal of Immunology. (in press). (1995)

Koichiro Ozawa：“研究磷脂酶 D 和蛋白激酶 C 在大鼠肥大细胞 (RBL-2H3) 系对 Ca 离子载体 A23187 的胞吐反应中的作用。”

Koichiro Ozawa: "Different isozymes of protein kinase C show each specific role in RBL-2H3 cells." Neurochemical Research. 19. 877-879 (1994)

Koichiro Ozawa：“蛋白激酶 C 的不同同工酶在 RBL-2H3 细胞中显示出各自的特定作用。”