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高分解能ビデオ顕微システムによるリセプター脱感作の動態解析

使用高分辨率视频显微镜系统进行受体脱敏动力学分析

基本信息

批准号：
05857257
负责人：
小澤孝一郎
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.初代神経培養細胞におけるリセプター脱感作現象の動態解析を試み、以下の実績を得た。(1)抗リセプター抗体は、その特異性の問題からアミノ酸配列のN末端側に対するものが多いが、このN末端は細胞膜の細胞質側に突出している。したがって、生きた細胞での抗体の感作を行うためには細胞内への注入が必要である。そのため、まず細胞内へのマイクロインジェクション法の確率を試み、細胞内への抗体あるいは酵素蛋白質の注入を可能にした。(2)次に、金コロイドで標識した抗ドーパミンD_2リセプター抗体をこの方法により細胞内へ注入したが、細胞膜への特異的な結合が認められなかった。その原因が抗体の特異性の低さにあると考え、現在、より特異性の高い抗体の作成を進めている。2.リセプター脱感作と関係の深い伝達物質の開口放出の動態解析をラット肥満細胞系であるRBL-2H3細胞を用いて行い、以下に示す新知見を得た。(1)RBL-2H3細胞における抗原抗体刺激による開口放出には各種プロテインキナーゼCアイソザイムの内、betaとdeltaが特異的に関与する(J.Biol.Chem.268.1749-1756,1993;268.2280-2283,1993)。(2)プロテインキナーゼCgammaは他のプロテインキナーゼCアイソザイムの働きを特異的に抑制し、その結果プロテインキナーゼCbetaあるいはdeltaによる開口放出を阻害する(Molecular Biology of the Cell in press)。(3)高分解能ビデオ顕微システムを用いた解析の結果、RBL-2H3細胞における個々の開口放出の過程は33msec以下の速い反応であること、さらに、細胞刺激の種類に応じて、異なる情報伝達系を経由し、異なる時間経過で開口放出が引き起こされること、等が明らかになった。(J.Immunol.in press;J.Cell.Biol.投稿準備中)。

1. Dynamic analysis of the phenomenon of desensitization in cultured cells of the first generation of Shinji was carried out, and the following achievements were obtained. (1) The problem of the specificity of the anti-リセプターantibody and the specificity of the anti-リセプターantibodies and the N-terminus of the acid ligand Side に対するものが多いが, このN-terminal は cell membrane のcytoplasmic side に protruding している.したがって, raw きたcells and でのantibody のsensitivity を行うためにはへのinjection がである is necessary. The accuracy of the intracellular intracellular そのため、まずへのマイクロインジェクション methodをIt is possible to inject intracellular antibodies, enzymes and proteins. (2) 日本に、金コロイドでLOGO したanti-ドーパミンD_2リセプターantibody をこのThe method is to inject したが into the cells and bind ながが to the cell membrane with へのspecific にられなかった. The cause of the antibody's specificity is low and the antibody's specificity is low. Now, the specificity of the antibody is high and the antibody is made. 2. Dynamic analysis of the relationship between desensitization and material release and the use of RBL-2H3 cells in the RBL-2H3 cell line. The following is a summary of the new knowledge obtained. (1) RBL-2H3 cell antigen and antibody stimulate the opening of the RBL-2H3 cells and release various peptides and beta-delts aがspecific に关 and する (J. Biol. Chem. 268.1749-1756, 1993; 268.2280-2283, 1993). (2) プロテインキナーゼCgammaは他のプロテインキナーゼCアイソザイムの働きをSpecial に Suppressionし, Molecular Biology of the Cell in press). (3) The results of high-resolution analysis of high-resolution microorganisms, and the process of releasing RBL-2H3 cells from each opening, and the reaction speed is less than 33 msec.ること, さらに, cell stimulation type に応じて, different なるinformation 伝达式を経yu し, Different time has passed and the opening has released the がinduced きこされること, and the が明らかになった. (J. Immunol. in press; J. Cell. Biol. In preparation for submission).