マルチプローブ蛍光顕微鏡の開発と細胞内情報伝達機構解明への応用

多探针荧光显微镜的发展及其在阐明细胞内信号转导机制中的应用

• 批准号: 08772095
• 负责人: 小澤 孝一郎
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08772095/
• 关键词: マルチプローブ蛍光顕微鏡; RBL-2H3細胞; 膵β細胞株MIN6細胞; 開口放出; ヒスタミン; インスリン; 細胞内情報伝達; 薬効解析

マルチプローブ蛍光顕微鏡の開発とその細胞内情報伝達機構解明への応用を試み、以下の実績を得た。1.マルチプローブ蛍光顕微-ビデオシステムの開発2種類の蛍光像を同時にリアルタイムで観察し、蛍光物質の細胞内動態及び薬理作用を細胞レベルで解析することを目的として、顕微鏡、光学フィルター、超高感度SITカメラ、高画質業務用ビデオデッキ、コンピューター画像解析装置を組み合わせて、マルチプローブ蛍光顕微-ビデオシステムを開発した。2.RBL-2H3細胞開口放出の細胞内情報伝達系の解明アレルギー反応時に重要な役割を演じる肥満細胞からのヒスタミンの遊離機構を、モデル細胞であるRBL-2H3細胞と本研究において開発したマルチプローブ蛍光顕微ビデオシステムを用い解析した。その結果、キナクリン蛍光の放出としてヒスタミンの細胞外への遊離を捉え、同時にfluo-3蛍光として細胞内カルシウムの変化を捉えることに成功した。さらに、各種薬物の影響を検討した結果、開口放出には、複数の情報伝達系が異なる経路で異なる時間軸を持って働いていることを発見した(FEBS letters 398,67-73;Biochem.Biophys.Res.Commun.222,243-248;J.Immunol 157,1625-1629)。3.膵臓β細胞からのインスリン放出の可視化血糖値維持において重要な役割を果たしている膵臓β細胞からのインスリンの放出機構を、モデル細胞である膵臓β細胞株(MIN6)と上記(1)で開発したマルチプローブ蛍光顕微-ビデオシステムを用い解析した。その結果、インスリン含有顆粒内に蛍光性を持つ薬物であるキナクリンを特異的に取り込ませることにより、インスリンの細胞外への放出を可視化することに成功した(Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis in Press)。

The development of optical microscopes and the application of intracellular information transmission mechanisms were studied. The following results were obtained 1. The development of two kinds of optical images simultaneously, the observation of intracellular dynamics and biological effects of optical substances, the analysis of cellular dynamics, the combination of micromirrors, optical microscopes, ultra-high sensitivity SIT models, and high-quality image analysis devices. The first is to open the door to the world. 2. In RBL-2H3 cells, the release of intracellular information from cell openings is an important factor in the development of cellular mechanisms for the release of intracellular information from cell openings. As a result, the release of light from the cell and the release of light from the cell were successful, while the release of light from the cell was successful. In addition, the effects of various substances are discussed in the results, open emission, and multiple information transmission systems. The Timeline is maintained in different ways (FEBS letters 398, 67 -73; Biochem.Biophys.Res.Comm.222, 243 -248; J. Immunol 157, 1625 -1629). 3. β-cell release and visualization of blood glucose value maintenance are important for the analysis of β-cell release mechanism and β-cell release mechanism (MIN6) and (1) above. The results showed that the release of intracellular fluorescent substances containing intracellular fluorescent substances was successfully visualized in the Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis in Press.

项目成果

Koichiro Ozawa: "Role of calcium,protein kinase C and MAP kinase in the activation of mast cells." Allergology International. 45. 73-84 (1996)

Koichiro Ozawa：“钙、蛋白激酶 C 和 MAP 激酶在肥大细胞激活中的作用。”

Koichiro Ozawa: "Interactions between protein kinase C and PH domains : Protein kinase C competes with phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate for the binding to PH domains." The Journal of Biological Chemistry. (in press). (1997)

Koichiro Ozawa：“蛋白激酶 C 和 PH 结构域之间的相互作用：蛋白激酶 C 与磷脂酰肌醇 4,5-二磷酸竞争与 PH 结构域的结合。”

小澤孝一郎: "脳シグナルカスケードと精神疾患(神経伝達物質受容体と関連分子:構造と機能)" 学会出版センター, 220 (1996)

小泽晃一郎：“脑信号级联和精神疾病（神经递质受体和相关分子：结构和功能）”学会出版中心，220（1996）

Koichiro Ozawa: "Quantitative analysis of exocytosis visualized by video-enhanced light/fluorescence microscope revealsd two distinct components of exocytosis in RBL-2H3 cells." FEBS letters. 398. 67-73 (1996)

Koichiro Ozawa：“通过视频增强光/荧光显微镜对胞吐作用进行可视化定量分析，揭示了 RBL-2H3 细胞中胞吐作用的两个不同组成部分。”

Koichiro Ozawa: "Video-microscopy for analysis of molecular dynamics in cells." Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. (in press). (1997)

Koichiro Ozawa：“用于分析细胞分子动力学的视频显微镜。”