腎尿細管上皮細胞株LLC-PK_1における細胞外ATPによる細胞増殖と細胞死の調節

肾小管上皮细胞系LLC-PK_1细胞外ATP对细胞增殖和细胞死亡的调节

• 批准号: 06772188
• 负责人: 原田 均
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: University of Shizuoka
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06772188/
• 关键词: LLC-PK_1細胞; 細胞外ATP; 細胞死; 細胞増殖; 腎尿細管; プリン受容体

本研究課題は、腎尿細管上皮細胞株LLC-PK_1の増殖と死に対する細胞外ATPの調節の機構、特にその受容体との関わりを中心に明らかにしようと行った。最初に増殖に及ぼす影響を検討したところ、対数増殖期の細胞では細胞外のATPは、増殖を強く促進することが明らかになった。そこで、ATPに特異的に結合するプリン(P_2)受容体各サブタイプに選択的な誘導体の増殖促進能を比較したところ、P_<2z>受容体アゴニスト3'-O-(benzoyl)-benzoylATPが最も強い作用を示した。次に、各種蛋白リン酸化酵素阻害薬の影響を調べると、Ca^<2+>/カルモデュリンキナーゼII阻害薬KN-62に最も強い阻害作用を見出した。これらのことは、対数増殖期の細胞において細胞外のATPがP_<2z>受容体-Ca^<2+>/カルモデュリンキナーゼII活性化を介して細胞増殖を促進させることを示唆している。一方、単層上皮を形成し増殖を停止した細胞においては、細胞外ATPによる顕著な増殖促進作用は認められなかった。これは、コラーゲン処理した膜上に培養した細胞を用い頂膜側あるいは基底膜側から作用させた場合でも同様であった。そこで、本培養条件下血清飢餓によって引き起こされる細胞死に及ぼす細胞ATPの影響について乳酸脱水素酵素活性の細胞からの漏出を指標に検討した。その結果、頂膜側からのATP添加は血清飢餓によって引き起こされる細胞死にほとんど影響しなかったが、基底膜側から添加は細胞死を促進させた。このことは、増殖を停止した細胞において、基底膜上にプリン受容体が存在し、細胞死と関連していることを示唆している。本研究計画により、腎尿細管において細胞外のATPが細胞増殖ならびに細胞死の制御因子として機能することを示すことができ、細胞間情報伝達に関与する細胞外ATPの作用機序および生理的役割の一端を明らかにすることができた。

In this study, the urinary tube epithelial cell line LLC-PK_1 was cloned, and the extracellular ATP organ and the special recipient cell center were used in this study. In the first place, colonization and colonization have a negative effect on the growth rate, the number of colonies in the reproductive period, the extracellular ATP, and the promotion of colonization. The colonization promotion ability of the combination of the receptor (ATP) and the receptor (benzoyl) of each recipient is higher than that of the recipient. The most potent effect of the recipient is shown. In the second phase, various protein acidifying enzymes block the effect of calcium, calcium and lt;2+>/. Do not affect the effect of II on the strongest effect of KN-62. During the reproductive period, the extracellular ATPase P _ & lt;2z> receptor-Ca ^ & lt;2+>/ receptor was activated by II. The promotion of cellular colonization was induced and abetted. On the one hand, the formation of epithelium, the formation of colonization, the cessation of cellular proliferation, the proliferation promotion of extracellular ATP, the promotion of colonization, the formation of epithelium, the The cells on the membrane were treated with the membrane, the basement membrane, the basement membrane and the membrane. Under the condition of this culture, the serum concentration of lactic acid dehydrase (lactic acid dehydrase), the activity of lactic acid dehydrase (LDH) and the leakage of lactic acid dehydrase (lactic acid dehydrase) were detected in the serum under the condition of this culture. The results showed that the serum was added to the ATP, the cell death was induced, the cell death was induced, and the basement membrane was added to promote cell death. The presence of the receptor on the basement membrane, the death of the cell, the presence of the receptor on the basement membrane, the presence of the receptor on the basement membrane, the presence of the receptor on the basement membrane, the presence of the receptor on the basement membrane, the presence of the capacitor on the basement membrane, and cell death. In this study, the control factors of cell death, cell death, ATP, extracellular ATP, extracellular DNA and extracellular DNA were studied.