放射線と活性酸素に対する適応におけるOxyRレギュロン遺伝子群の役割

OxyR 调节子基因在适应辐射和活性氧中的作用

基本信息

批准号：
06780434
负责人：
垰和之
金额：
$ 0.64万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06780434/
关键词：
酸化ストレスセンサータンパク転写アクチベータ

项目摘要

大腸菌OxyR蛋白は、放射線と活性酸素に対する適応応答を調節している転写アクチベータ蛋白である。oxyR遺伝子を欠損する変異株は電離放射線や活性酸素増産剤に対して高感受性であると同時に、空気中での生育も悪い。従ってOxyRにより調節される遺伝子にはこれらのストレスに対する防御において重要な役割を持っているものが存在すると考えられる。この研究は、これらのOxyRによって調節されている未知の遺伝子を同定、解析することにより適応応答の分子機構を明らかにすることを目的として行い以下の結果を得た。1)クローン化したOxyRレギュロン遺伝子の構造解析これまでにクローン化したOxyRレギュロン遺伝子群のうち、まだ塩基配列の決定などの構造解析を行っていないものについて塩基配列の決定、転写開始点の決定などの基本的な構造の解析を行った。その結果、OxyRにより調節されるものとしてチオレドキシンと高い相同性をもつ新たな遺伝子(蛋白)を同定した。2)相同組換による欠損変異株の作成クローン化した遺伝子との相同組替えを用いて、染色体上の相当遺伝子の破壊を行った。現在、作成した変異株について放射線等に対する感受性などを調べている。3)遺伝子産物の増産、精製、機能解析クローン化した遺伝子を、T7プロモータを用いて大量発現させ、遺伝子産物の精製を行った。精製した蛋白を用いて生化学的性質を調べる予定である。

大肠杆菌氧蛋白是一种转录激活蛋白，可调节对辐射和活性氧的适应性反应。缺乏Oxyr基因的突变体对电离辐射和活性氧促进剂高度敏感，与此同时，它们不在空气中生长。因此，据信，某些受Oxyr调节的基因在保护这些应力方面具有重要作用。进行这项研究的目的是通过鉴定和分析由这些氧气调节的未知基因来阐明自适应反应的分子机制。 1）分析了基本结构（例如基本序列的确定和转录起始点），分析了尚未经过结构分析（例如碱基序列测定等）的克隆氧气调节基因的结构分析。结果，具有与硫氧还蛋白高的同源性高同源性的新基因（蛋白质）被确定为Oxyr的调节。 2）使用克隆基因的同源重组同源重组来创建有缺陷的突变体，以破坏染色体上相应的基因。目前，我们正在研究为辐射和其他因素敏感的突变菌株。 3）使用T7启动子大量表达克隆基因的产生，纯化，功能分析，并纯化基因产物。将使用纯化的蛋白质检查生化特性。