酸化ストレスに対する適応応答のセンサーアクチベータ蛋白OxyRの機能ドメイン解析

传感器激活蛋白 OxyR 对氧化应激适应性反应的功能域分析

基本信息

批准号：
05268206
负责人：
垰和之
金额：
$ 1.6万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05268206/
关键词：
転写因子機能ドメインストレス応答

项目摘要

大腸菌OxyR蛋白は、細胞が酸化ストレスにさらされた時に発現する遺伝子群の転写活性化蛋白である。この研究では、OxyR蛋白の持つストレスセンサー、特異的DNA結合能、RNAポリメラーゼとの相互作用などの諸機能が、蛋白内のどの部分によって担われているかを分子遺伝学的手法により明かにすること、及び、OxyR蛋白により発現の調節される遺伝子のうち、未同定のものについて、それをクローン化し構造解析を行うことにより、酸化ストレス応答のうちOxyR応答の全体像を明かにすることを目指している。今年度は、次のような結果が得られた。1)OxyR蛋白が相互作用すると考えられるRNAポリメラーゼ上の部位の同定を行うため、OxyR蛋白による転写活性化に欠損を持つRNAポリメラーゼの変異体を得ることを試み、そのような性質を示す変異体を18クローン得た。変異部位の同定、変異蛋白による試験管内の実験の結果、OxyR蛋白は、RNAポリメラーゼのαサブユニットのC末端に近い部位のうち、2ヶ所と物理的に接触していることを示す証拠が得られた。2)1)で得られたRNAポリメラーゼ変異をサプレスするoxyR遺伝子の変異を同定することにより、RNAポリメラーゼと相互作用するOxyR蛋白内の部位の同定を行うため、oxyR遺伝子にランダムに変異を導入したライブラリーを作成した。現在、これを用いて、oxyR変異株のスクリーニングを行っている。3)OxyR蛋白により発現の調節される遺伝子を修種クローン化した。そのうちのいくつかについては構造解析を行った。現在引き続き残りのクローン構造解析、それらの遺伝子を欠損する変異株の作成などの作業を行っている。

大肠杆菌氧气蛋白是当细胞暴露于氧化应激时表达的基因的转录激活蛋白。这项研究旨在阐明从分子遗传技术中，在氧化应激反应中的整体情况，从分子遗传技术中确定蛋白质的哪些部分负责应激传感器，特定的DNA结合能力以及与RNA聚合酶的相互作用，并与RNA聚合酶相互作用，以及克隆未鉴定的基因，这些基因受氧蛋白和结构分析的调节。今年，获得以下结果：1）为了鉴定被认为与Oxyr蛋白相互作用的RNA聚合酶上的位点，我们试图获得Oxyr蛋白在转录激活中有缺陷的RNA聚合酶的突变体，并获得了18个表现出此类特性的18个突变体。在体外使用突变蛋白的突变位点和实验鉴定，证明了Oxyr蛋白与RNA聚合酶α-亚基的C端附近的两个位点的物理接触。 2）通过鉴定Oxyr基因中抑制1）中获得的RNA聚合酶突变的突变，我们创建了一个库，在该文库中，将突变随机引入oxyr基因，以识别与RNA聚合酶相互作用的氧蛋白中的位点。目前，这用于筛选氧气突变体。 3）将氧蛋白调节的基因克隆到修饰物种中。其中一些经过结构分析。当前，我们正在继续分析其余的克隆结构，并创建缺少这些基因的突变菌株。