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酸化ストレスに対する適応応答のセンサーアクチベータ蛋白OxyRの機能ドメイン解析

传感器激活蛋白 OxyR 对氧化应激适应性反应的功能域分析

基本信息

批准号：
05268206
负责人：
垰和之
金额：
$ 1.6万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05268206/
关键词：
転写因子機能ドメインストレス応答

项目摘要

大腸菌OxyR蛋白は、細胞が酸化ストレスにさらされた時に発現する遺伝子群の転写活性化蛋白である。この研究では、OxyR蛋白の持つストレスセンサー、特異的DNA結合能、RNAポリメラーゼとの相互作用などの諸機能が、蛋白内のどの部分によって担われているかを分子遺伝学的手法により明かにすること、及び、OxyR蛋白により発現の調節される遺伝子のうち、未同定のものについて、それをクローン化し構造解析を行うことにより、酸化ストレス応答のうちOxyR応答の全体像を明かにすることを目指している。今年度は、次のような結果が得られた。1)OxyR蛋白が相互作用すると考えられるRNAポリメラーゼ上の部位の同定を行うため、OxyR蛋白による転写活性化に欠損を持つRNAポリメラーゼの変異体を得ることを試み、そのような性質を示す変異体を18クローン得た。変異部位の同定、変異蛋白による試験管内の実験の結果、OxyR蛋白は、RNAポリメラーゼのαサブユニットのC末端に近い部位のうち、2ヶ所と物理的に接触していることを示す証拠が得られた。2)1)で得られたRNAポリメラーゼ変異をサプレスするoxyR遺伝子の変異を同定することにより、RNAポリメラーゼと相互作用するOxyR蛋白内の部位の同定を行うため、oxyR遺伝子にランダムに変異を導入したライブラリーを作成した。現在、これを用いて、oxyR変異株のスクリーニングを行っている。3)OxyR蛋白により発現の調節される遺伝子を修種クローン化した。そのうちのいくつかについては構造解析を行った。現在引き続き残りのクローン構造解析、それらの遺伝子を欠損する変異株の作成などの作業を行っている。

Escherichia coli OxyR protein は, cell acidification ストレスにさらされた时に発appears する伝子群の転WRITE activated protein である.この Research では, OxyR protein のhold つストレスセンサー, specific DNA binding energy, RNA ポリメラーゼとの mutual The functions of various functions in proteins, the molecular genetic techniques of molecular genetics, And び, OxyR protein により発appears to regulate the される伝子のうち, the unidentified のものについて, それをクローン化しstructure The analysis of the を line of the うことにより, the acidification of the ストレス応 Answer のうちOxyR応 Answer of the whole image を明かにすることを Eye refers to している. This year's annual results are the same as those of the second time. 1) OxyR protein が interaction test えられるRNA ポリメラーゼ上の区の同定を行うため、OxyR protein による転Written Activated RNA is damaged and the properties of the RNA are different. The same determination of the different parts, the results of the different protein in the test tube, the OxyR protein, RNAポリメラーゼのα The C-terminal part of the C-terminal is close to the point of contact, and the physical contact of the 2-pointer is shown in the test. 2)1)で得られたRNAポリメラーゼ変isoをサプレスするo xyR缝子の変differentを同定することにより、RNAポリメラーゼとInteraction is the same as the position in the OxyR protein, and the oxyR remaining part is the same as the original one. Now, the use of これをいて, oxyR変different strains of のスクリーニングを行っている. 3) The OxyR protein regulates the appearance of the protein and regulates the production of the protein.そのうちのいくつかについてはstructural analysisを行った. Now we quote the structural analysis of the き続き residual りのクローン, それらの伝子を无码する変different strains of などの Job を行っている.