ヒト血小板及びラット唾液腺の分泌を調節する低分子量GTP結合蛋白質に関する研究

调节人血小板和大鼠唾液腺分泌的低分子量 GTP 结合蛋白的研究

• 批准号: 06780500
• 负责人: 永田 浩一
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Gifu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06780500/
• 关键词: 巨核球系培養細胞(MEG-01); 血小板; 低分子量GTP結合蛋白質; 三量体型GTP結合蛋白質; 細胞分化; ram p25; Rac2; Rallp

1.血小板のモデル細胞系としてホルボールエステルにより分化誘導させたヒト巨核球系培養細胞MEG-01を用いて、各種G蛋白質などシグナル分子の分化誘導に伴う変動・分泌応答への関与について検討した。1)PMA処理により分化させたMEG-01細胞を用いてトロンビン刺激し、血小板α顆粒内蛋白質であるβ-トロンボグロブリンの産生・分泌を調べたが、著明な分泌亢進は認められなかった。2)MEG-01細胞は、三量体型G蛋白質、Gs,Gi_2,Gi_3,Gz,G_<11>G_<12>のαサブユニットおよびβサブユニットが蛋白質レベルで検出された。MEG-01細胞のPMAによる分化誘導により、三量体型G蛋白質のGi_2α,Gi_3αおよびGβが日のオーダーで漸増したが、他のものはほとんど変化しなかった。一方、低分子量G蛋白質のRac2は、PMA処理後30分から著明に増加した。3)PMA処理したMEG-01細胞から出現する血小板様顆粒を収集し、その低分子量G蛋白質のmRNAおよび蛋白質レベルでの発現を検討した。rap1A,rap1B,rap2B,ralA,rhoA,rac1,rac2,CDC42Hs,rab1,rab3B,rab4,rab6,ramおよびranについてRT-PCRを行ったところ、rab4以外のすべてのDNAの増幅を認めた。また、Rap1,RhoA,Rac,CDC42,Rab6,Rab8について蛋白質レベルでの発現が確認された。4)MEG-01細胞においてPKC-γ以外のPKCα,-βI,-βII,-δ,-ε,-η,-θおよび-ζの発現を認めたが、顆粒中にはPKC-γおよび-ζタイプが検出されなかった。蛋白質レベルで血小板に検出されるサブタイプはPKCα,-βI,-βIIおよび-ζであるが、顆粒中には量的に少ないがいずれも発現していた。MEG-01細胞では、上記4種に加えてPKC-εおよび-θが検出された。2.ラット唾液腺細胞の細胞分画により低分子量型Rap1pが顆粒膜に、三量体型G蛋白質Gtは形質膜に局在することが明らかとなった。

1. Platelet cell line MEG-01 cells were cultured in vitro and various G proteins were expressed in vitro. 1)PMA treatment induced differentiation of MEG-01 cells and the production and secretion of platelet α-granule protein. 2)MEG-01 cells contain G protein, GS, Gi_2, Gi_3, Gz, G_<11>G_<12>α and β proteins. MEG-01 cells were induced to differentiate by PMA, and the Gi_2α, Gi_3 α, and Gβ trisomy G proteins gradually increased. On the one hand, Rac2 of low molecular weight G protein increased significantly 30 minutes after PMA treatment. 3) To investigate the expression of platelet granules, mRNA and protein of low molecular weight G protein in MEG-01 cells treated with PMA. rap1A,rap1B,rap2B,ralA,rhoA,rac1,rac2,CDC42Hs,rab1,rab3B,rab4,rab6,ram, ran, etc. The discovery of Rap1,RhoA,Rac,CDC42,Rab6,Rab8 was confirmed. 4) PKCα,-βI,-βII,-δ,-ε,-η,-θThe protein content of platelets is expressed in the form of PKCα,-βI,-βII, and in the form of granules. MEG-01 cell line contains PKC-ε-θ2. Cell analysis of salivary gland cells: low molecular weight Rap1p, granular membrane, triploid G protein, and plasma membrane.

项目成果

Nagata,K-i.: "Possible interaction of haemoglobin with a low Mr GTP-binding protein,ram p25." Biochem.Mol.Biol.Intl. (in press).

Nagata,K-i.：“血红蛋白可能与低 Mr GTP 结合蛋白 ram p25 相互作用。”

Y.Kameyama: "Localization of a low Mr GTP-binding protein,rap1 protein,in plasma membranes and secretory granule membranes of rat parotid gland." Life Sciences. 55. 213-219 (1994)

Y.Kameyama：“大鼠腮腺质膜和分泌颗粒膜中低 Mr GTP 结合蛋白 rap1 蛋白的定位。”

K.-i.Nagata.: "Haemoglobin inhibits GTP-hydrolysis and GDP/GTP-exchange activities of a low M_r GTP-binding protein,ras p21." Brit.J.Haematol.88. 706-711 (1994)

K.-i.Nagata.：“血红蛋白抑制低 M_r GTP 结合蛋白 ras p21 的 GTP 水解和 GDP/GTP 交换活性。”

Nagata,K-i.: "Cloning of cDNAs encoding a cell-cycle-regulatory GTP-binding low-Mr_r(GBLM)protein,Ran/TC4 from micronucleated Tetrahymena thermophila and amicronucleated Tetrahymena pyriformis." Gene. 144. 123-125 (1994)

Nagata,K-i.：“从微核嗜热四膜虫和无微核梨形四膜虫中克隆编码细胞周期调节 GTP 结合低 Mr_r(GBLM) 蛋白 Ran/TC4 的 cDNA。”

K.-i.Nagata: "Subucellular localization of a low Mr GTP-binding protein,c25KG,in resting and stimulated human platelets." Biochem.Biophys.Res.Commun.195. 1081-1088 (1993)

K.-i.Nagata：“低 Mr GTP 结合蛋白 c25KG 在静息和刺激的人类血小板中的亚细胞定位。”