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ホヤの出芽における分化転換を制御する分子機構の解析

海鞘出芽过程中控制转分化的分子机制分析

基本信息

批准号：
06780614
负责人：
藤原滋樹
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Kochi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ホヤの出芽においては、消化器官、神経腺など多くの組織・器官が分化多能性の囲鰓腔上皮の分化転換によって生じる。レチノイン酸(RA)は囲鰓腔上皮の脱分化を誘導し、芽体前後軸の決定に関与する内在性因子と考えられている。本研究では、RA合成酵素であるアルデヒド脱水素酵素(ALDH)、RA受容体(RAR)、多くの動物でパターン形成に関与するホメオボックス遺伝子の分子クローニングと発現解析を行った。PCR法によって、750bpのALDH遺伝子断片を30クローン、169bpのRAR DNA結合ドメインのcDNA断片を2クローン、76bpのホメオボックス遺伝子断片を8クローン単離した。1.ホヤのALDH遺伝子断片各クローンから合成したプローブを用いてノザン解析を行ったところ、2種類のALDH遺伝子が親と芽体で発現していることが分かった。芽体発生に伴う発現量の変化はなかった。これらのうち一方はマウスのRA合成酵母AHD-2とよく似たアミノ酸配列を持つことが分かった。2.ホヤのRAR DNA結合ドメインのcDNA断片から予想されるアミノ酸配列は脊椎動物のRARと85%程度の類似性を示し、他の核内ホルモン受容体との類似性は比較的低かった。Zincフィンガーの形成に必須のシステインも完全に保存されていた。また標的塩基配列の認識を担うアミノ酸配列も脊椎動物のRARと同じタイプであった。RT-PCR解析を行ったところ、親と発生初期の芽体ではmRNAの発現が見られず、囲鰓腔上皮の脱分化が始まる発生開始12時間以降の芽体で発現が見られた。3.ホヤのホメオボックス遺伝子の断片8クローンの中にはAntennapediaや、脊椎動物でRAによる発現制御を受けているlabialなどのように、前後軸パターンの形成に関与するHOM/Hoxタイプの遺伝子のホモログと思われるものがあった。RT-PCR解析により、これらのクローンに対応する遺伝子が親と芽体で発現していることが分かった。Antennapediaタイプの遺伝子についてはRACE法により3'末端側約400bpのcDNAをクローニングした。

The budding, digestive organs, nervous glands, multiple tissues, organs, differentiation pluripotency, and differentiation of gill epithelium RA induces dedifferentiation of gill epithelium, determines the anteroposterior axis of bud, and examines the intrinsic factors involved. In this study, we analyzed the molecular evolution of RA synthase, RA receptor (RAR), RA dehydrase (ALDH) and RA synthase related to the formation and development of various animal enzymes. PCR method: 750bp ALDH gene fragment 30 bp, 169bp RAR DNA binding gene cDNA fragment 2 bp, 76bp ALDH gene fragment 8 bp 1. ALDH gene fragments are synthesized and analyzed in different ways, 2 kinds of ALDH gene fragments are produced in different ways. The bud development is accompanied by the development of quantity and transformation. The yeast AHD-2 was synthesized by the method of " 2. The similarity of RAR DNA binding site cDNA fragments to RAR in vertebrates was 85%, and the similarity of RAR DNA binding site cDNA fragments to RAR in other vertebrates was lower than that in other vertebrates. The formation of Zinc oxide must be completely preserved. The understanding of the basic structure of the vertebrate is very important RT-PCR analysis showed that mRNA expression was detected in buds at the beginning of development, and dedifferentiation of gill epithelium was detected in buds at the beginning of development. 3. HOM/HOX/HOX RT-PCR analysis of the DNA sequence of the parent bud Antennapedia is a 3'-terminal cDNA fragment of approximately 400bp.