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遺伝子ターゲッティング法を用いた紫外線高感感受性修復欠損マウス系統の樹立

基因打靶法建立紫外线敏感修复缺陷小鼠品系

基本信息

批准号：
06780707
负责人：
原田良信
金额：
$ 0.7万
依托单位：
National Institute of Radiological Sciences
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06780707/
关键词：
マウスターゲッティング色素性乾皮症 XP ERCC5 紫外線ノックアウト

项目摘要

前年度までの研究によりヒト色素性乾皮症G群原因遺伝子XPGのマウスホモログであるxpgのcDNAおよびゲノミックDNAをクローニングした。マウスゲノミックDNAからそれぞれ異なったエクソンを不活性化する3種類(TV1,TV2,TV3)のターゲッティングベクターを作製した。これらのベクターをマウスES細胞(D3)にトランスフェクションし、G418とGANCでセレクションを行った。TV2を用いた実験では、7.5×10^6のES細胞から200の418′GANC′コロニーを得た。PCR法を用いた実験により、これらのうち13.3%が相同組み換え体であることが判明した。さらに5つのコロニーについてサザン法を用いた実験を行ったところ、5つ全てが相同組み換え体であると確認された。同様にTV3を用いた実験では7.5×10^6のES細胞から380のG418′GANC′コロニーを得、PCR法により、これらのうち24.0%が相同組み換え体であることが判明し、さらに32個のコロニーについてサザン法を用いた茂を行ったところ、32個全てが相同組み換え体であると確認された。TV1を用いた実験においては相同組み換え体と思われるコロニーは得られなかった。TV2およびTV3の実験から得られた相同組み換え体と確認されたES細胞の中から、染色体数や形態が正常であると思われるクローンを選び、C57BL/6の初期胚にマイクロインジェクション法を用いて導入したところ、キメラマウスが誕生した。今後これらのキメラマウスから紫外線高感受性しゅうふく欠損マウス系統を樹立する予定である。

In the past year, the study of Xeroderma pigmentosum G group causative gene XPG has been carried out. There are three kinds of inactivation (TV1,TV2,TV3) and the control of DNA. The ES cell (D3) and G418 are connected. TV2 is available in 7.5×10^6 ES cells and 200 × 418′GANC′ cells. The PCR method was used to determine the difference between the two groups by 13.3% 5 In the same way, TV3 was used to detect 7.5×10^6 ES cells, 380 of G418′GANC′ were detected by PCR, 24.0% of them were detected by PCR, 32 of them were detected by PCR. TV1 is the same as the TV 1. TV2 and TV3 were found to have the same group of chromosomes and confirmed to have normal chromosome number and morphology. C57BL/6 was born in the early stage of embryo transformation. In the future, we will establish a predetermined system for high UV sensitivity.