遺伝子ターゲッティング法を用いた紫外線高感受性修復欠損マウス系統の樹立

基因打靶法建立紫外线敏感修复缺陷小鼠品系

• 批准号: 05780639
• 负责人: 原田 良信
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: National Institute of Radiological Sciences
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05780639/
• 关键词: マウス; 修復遺伝子; ERCC5; 遺伝子ターゲッティング

これまでの研究により研究によりマウス修復遺伝子ERCC5cDNAをクローニングした。本年度の研究によりマウスERCC5cDNAの全領域には対応していないが、ゲノミッククローンを数個得た。この中の1つのゲノミッククローンは全長が約19kbあり、少なくとも700bp以上ある1つのエクソンを含んでいることが判った。よってこのゲノミッククローンを用いてターゲッティングベクターを作製することにした。このターゲッティングベクターは全長約15kbのゲノミックDNAを含み、上記のエクソンの中にある制限酵素サイト(SphI)の部分にプロモーターを含むMC1neo遺伝子を挿入し、さらに約1kb下流にある制限酵素サイト(BglI)の部分にプロモーターおよびPolyAシグナルを持つHSV-TK遺伝子を挿入してあり、Positive-Negative selectionによって相同組み換え細胞を効率的に回収することが可能になっている。さらにMC1neo遺伝子の一部とHSV-TK遺伝子より上流のゲノミックDNAの塩基配列を基にPCRプライマーを設計し、相同組み換えにより遺伝子ターゲッティングが起こった場合に容易に検出できるようにした。このターゲッティングベクターを用いてマウス修復遺伝子ERCC5の遺伝子ターゲティングをES細胞に対して行った。総計で約4.3×10^6個のES細胞にターゲッティングベクターをトランスフェクションし、27,872個のG418耐性細胞を得た。このうちさらに676個のGANC耐性細胞を得た。しかしPCRとサザン法による検討の結果、遺伝子ターゲッティングが起こったと認められる細胞を発見するに至っていない。今後別なエクソン等を用いての遺伝子ターゲッティングを行う必要があると考えられる。

I don't know what to do. I don't know. I don't know what to do with ERCC5cDNA. In this year's study, there are several awards in the field of ERCC5cDNA. The overall length of 19kb is higher than that of 700bp, and there is no significant difference between the two. I don't know. I don't know. I don't know. The whole length of the 15kb is similar to that of the PolyA. In the previous section, the enzyme restriction enzyme (SphI) is in the middle, the MC1neo is in the lower stream of the 1kb, the enzyme restriction enzyme (BglI) is in the lower stream of the 1kb, and the restriction enzyme (BglI) is in the lower stream of the 1kb. Positive-Negative selection may have a negative effect on the cell rate of the same group. In the first part of the HSV-TK system, there is an upstream module. The DNA module is based on the basic PCR system design, and the same group is configured in the same group. It is easy to find out how to do it. You know, I don't know, I don't know, I don It was estimated that there were about 4. 3 × 10