遺伝子内で相補するカルモデュリン変異の分子生物学的研究

基因内互补钙调蛋白突变的分子生物学研究

• 批准号: 06740565
• 负责人: 大矢 禎一
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06740565/
• 关键词: カルモデュリン; 酵母; カルシニューリン; 細胞周期

われわれは多機能タンパク質である酵母カルモデュリン遺伝子に系統的に変異を導入し,温度感受性変異株を多数作製した。注目したアミノ酸残基は、カルモデュリンの標的蛋白質との結合に関わっている8つのフェニルアラニン残基である。得られた14個のカルモデュリンの温度感受性変異株で特筆すべきことは、非制限温度下で4つの異なる表面型を示したことであった。すなわち、1)スピンドル・ポール・ボディの複製、2)出芽、3)アクチンネットワークの制御、4)カルモデュリン自体の芽の部分への局在化、という4つの独立の過程の特異的欠損を持っていた。さらに異なる表現型を持つ変異の間に、遺伝子内相補という現象が見られたことから、カルモデュリンの多重機能性が遺伝学的に立証された。さらに10種類の変異カルモデュリンを大腸菌内で発現させ、各々の蛋白質をSDS-PAGEで判断して単一バンドになるまで精製した。精製した蛋白質を用い、ゲルオーバーレイ実験を行なって、カルモジュリン結合蛋白質の一つであるカルシニューリンの触媒サブユニットとの結合を調べたところ、F12A,F16A,F19A変異を持つ変異カルモデュリンは、カルシニューリンとの結合活性を失っていた。カルシニューリンの変異株は、高Na+感受性、性フェロモン存在下の致死性等の性質を示すが、カルモジュリンのF12A,F16A,F19A変異も同様の表現型を示した。以上の結果から、カルモデュリンの標的蛋白質との結合に関するモデルを考案した。

There are many variations in the system of the multifunctional TANAPAK substance Yeast KALMODERIN gene introduced, and most temperature-sensitive strains are produced. Note that acid residues are associated with the binding of target proteins. The temperature sensitivity of 14 different plants was obtained. The temperature sensitivity of 4 different surface types was obtained under non-limiting temperatures. 1) The process of reproduction, 2) Bud, 3) Control of reproduction, 4) Partial transformation of the bud itself, 4) Specific deficiency of independent process. The phenomenon of inter-complementation between different phenotypes and different genes has been proved by multiple functional genes. The 10 different species were identified in E. coli and purified by SDS-PAGE. When refined proteins are used, they are processed in real time, and the binding activity of the catalyst support element of the kallikrein binding protein is adjusted. For example, F12A, F16A, and F19A are different from each other, and the binding activity of the kallikrein binding protein is lost. F12A, F16A, F19A of the different strains of the different strains with high Na+ sensitivity and lethality in the presence of the different strains of the different strains are shown. The above results show that the binding of the target protein is related to the protein binding.

项目成果

Y.Ohya: "Structur based systematic isolation of conditional-lethal mutations in the single yeast calmodulin gene" Genetics. 138. 1041-1054 (1994)

Y.Ohya：“单个酵母钙调蛋白基因中条件致死突变的基于结构的系统分离”遗传学。

Y.Ohya: "Diverse essential functions revealed by complementing yeast calmodulin mutants" Science. 263. 963-966 (1994)

Y.Ohya：“通过补充酵母钙调蛋白突变体揭示了多种基本功能”《科学》。

H.Qadota: "Conditional lethality of a yeast strain expressing human rhoA in place of RHO1" Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 91. 9317-9321 (1994)

H.Qadota：“表达人 rhoA 代替 RHO1 的酵母菌株的条件致死率”Proc.Natl.Acad.Sci.USA。

S.Yoshida: "Genetic interactions among genes involved in the STT4-PKC1 pathway of Saccharomyces cerevisiae." Mol. Gen. Genet.242. 631-640 (1994)

S.Yoshida：“酿酒酵母 STT4-PKC1 途径相关基因之间的遗传相互作用。”

S.Yoshida: "A hovel gene,STT4,encodes a phosphatidylinositol 4-kinase in the PKC1 pathway of Saccharomy ces cerevisiae" J.Biol.Chem.269. 1166-1171 (1994)

S.Yoshida：“hovel 基因，STT4，编码酿酒酵母 PKC1 途径中的磷脂酰肌醇 4-激酶”J.Biol.Chem.269。