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細胞周期を調節する多機能タンパク質の遺伝学的研究

调节细胞周期的多功能蛋白质的遗传学研究

基本信息

批准号：
06262206
负责人：
大矢禎一
金额：
$ 0.96万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06262206/
关键词：
酵母カルモデュリンカルシニューリン細胞周期

项目摘要

多機能タンパク質である酵母カルモデュリン遺伝子に系統的に変異を導入し、温度感受性変異株を多数作製した。カルモデュリンの標的蛋白質との結合に関わっている8つのフェニルアラニン残基に注目して実験を行った。得られた14個のカルモデュリンの温度感受性変異株で特筆すべきことは、非制限温度下で4つの異なる表現型を示したことであった。すなわち、1)スピンドル・ポール・ボディの複製、2)出芽、3)アクチンネットワークの制御、4)カルモデュリン自体の芽の部分への局在化、という4つの独立の過程の特異的欠損を持っていた。さらに異なる表現型を持つ変異の間に、遺伝子内相補という現象が見られたことから、カルモデュリンの多重機能性が遺伝学的に立証された。さらに10種類の変異カルモデュリンを大腸菌内で発現させ、各々の蛋白質をSDS-PAGEで判断して単一バンドになるまで精製した。精製した蛋白質を用い、ゲルオーバーレイ実験を行なって、カルモデュリン結合蛋白質のひとつであるカルシニューリンの触媒サブユニットとの結合を調べたところ、F12A,F16A,F19A変異を持つ変異カルモデュリンは、カルシニューリンとの結合活性を失っていた。カルシニューリンの変異株は、高Na+感受性、性フェロモン存在下の致死性等の性質を示すが、カルモジュリンのF12A,F16A,F19A変異も同様の表現型を示した。以上の結果から、カルモデュリンの標的蛋白質との結合に関するモデルを考察した。

A variety of yeast strains are introduced into the system and most of them are temperature-sensitive. The binding of the target protein to the target protein is closely related to the occurrence of the 8-terminal amino acid residues. The results showed that 14 different phenotypes of temperature sensitive plants were found at different temperatures. 1) The process of reproduction, 2) Bud, 3) Control of reproduction, 4) Partial transformation of the bud itself, 4) Specific deficiency of independent process. The phenomenon of inter-complementation between different phenotypes and different genes has been proved by multiple functional genes. The 10 different species were identified in E. coli and purified by SDS-PAGE. Refined proteins are used in the middle of the process, and they must be prepared in a way that allows them to bind to proteins. F12A, F16A, and F19A are different from each other in terms of binding activity. F12A, F16A, F19A of the different strains of the different strains with high Na+ sensitivity and lethality in the presence of the different strains of the different strains are shown. The above results show that the binding of the target protein is related to the protein binding.