ニジマスのスタニオカルシン遺伝子の発現と制御機構の解析

虹鳟鱼斯钙素基因表达及调控机制分析

• 批准号: 06760166
• 负责人: 森 司
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06760166/
• 关键词: スタニウス小体; スタニオカルシン; 遺伝子

ニジマスのスタニウス小体を取り出し、このスタニウス小体をグアニジンイソチアシアネートと酸性フェノールを用いてm-RNAを抽出し、さらにオリゴdtカラムを用いてポリ(A)RNAを抽出精製後λgt22Aを用いて約30万個のc-DNAライブラリーを作成した。又、既知のニジマス、スタニオカルシンのN末のアミノ酸配列に対応するDNA((1)AACTCCCCIGATGTIGC,(2)TGTGGIACITTTGCITGCCT)と20個のポリTをプライマーとして合成し、作成したc-DNAライブラリー100μlよりDNAを抽出し鋳型DNAとしてPCRを行った結果、(1)のプライマーで約2KbのDNAバンドを検出した。そのため、このPCR産物をTベクターに導入しシークエンスした結果、N末のアミノ酸配列の一部にシークエンスデーターが対応することからスタニオカルシン遺伝子と判断した。このPCR産物をプローブとしてc-DNAライブラリーより完全長のスタニオカルシンc-DNAをスクリーニングした結果、5個のクローンを選抜した。これらのクローンはお互いにに相同であることをプラークハイブリで確かめた。次に、このうちの一つのクローンの全塩基配列のシークエンスをした結果、263のアミノ酸配列を有する2153bpの遺伝子であった。この遺伝子は既知のウナギのスタニオカルシン遺伝子と80%の相同性を有し90%のアミノ酸相同性を有した。しかし、この遺伝子の発現をノーザンで調べた結果、ニジマスに10mMのCaClを注射したものとコントロールとでは有意な差が見られなかった。今後、この遺伝子を大腸菌で発現させ、精製したタンパクを用いた実験を試みる。

このスタニウス小体をグアニジンイソチアシアネートと acidic フェノールを extracted with いてm-RNAを, さらにオリゴdtカラムをいてポリ(A)RNAを was extracted and purified, and λgt22Aを was made of about 300,000 のc-DNAライブラリーを using いて. Also, it is known that のニジマス, スタニオカルシンのN-last のアミノ acid arrangement に対応するDNA ((1)AACT CCCCIGATGTIGC,(2)TGTGGIACITTTGCITGCCT)と20のポリTをプライマーとして synthesized, made into c-DNA ライブラリー100μl よりDNA を extracted The result of the 鋳-type DNA としてPCR row った, (1) のプライマーでabout 2Kb のDNA バンドを検出した.そのため, このPCR product をTベクターに imported しシークエンスした result, N-terminal のアミノ acid preparation The list of the first part of the series is the same as the last one.このPCR product をプローブとしてc-DNAライブラリーよりfull length のスタニオカルシンc-DNA をスクリーニングした results, 5 のクローンをselect した.これらのクローンはお Mutual いにに Same as であることをプラークハイブリで正かめた.时に、このうちの一つのクローンの全塩组组のシークエンスをしたAs a result, the acid composition of 263のアミノをhas 2153bpの缝子であった.こウナギのスタニオカルシン伝子と80%のidentityを有し90%のアミノ acid identityを有した.しかし、この伝子の発 appear をノーザンで调べたRESULT、ニジマスに10mMのCaClをしたものとコントロールとでは intentional な difference が见られなかった. From now on, we will test the use of refined coliforms and refined coliforms.