イヌインターロイキン8遺伝子の発現とイヌ好中球およびリンパ球に対する機能の解析

犬白细胞介素8基因表达及犬中性粒细胞和淋巴细胞功能分析

• 批准号: 06760254
• 负责人: 松本 安喜
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06760254/
• 关键词: インターロイキン-8(IL-8); 好中球; IL-8活性; cDNAクローニング; サイトカイン; 遊走試験; PCR

LPS刺激した健常犬の膝窩リンパ節由来単核球から抽出したmRNAよりcDNAを合成した。このcDNAを鋳型として,ヒトIL-8 cDNAの塩基配列をもとに作製したプライマーを用いてPCRを行ない,イヌインターロイキン-8(IL-8)cDNAに由来し,全蛋白コード領域を含むと思われる,約400bpのバンドが増幅された。このバンドから得られたクローンの塩基配列より,このクローンはヒト,ウサギ,ブタのIL-8 cDNAとそれぞれ76.5,80.2,87.0%の相同性を示す101アミノ酸をコードすることがわかった。さらに,得られたクローンをpcDL-SRa296発現ベクターに組み込み,MDCK細胞およびCos7細胞に導入したところ,その培養上清には好中球走化性を誘導する活性がBoyden chamber変法を用いたchemotaxis assayにおいて認められ,本クローンが機能的タンパクをコードすることが示された。さらに,イヌIL-8 cDNAをpMAL-cRI大腸菌発現ベクターにサブクローニングし,大腸菌DH5a株に導入したところ,IPTGによりマルトース結合蛋白(MBP)とイヌIL-8との融合蛋白が産生され,本蛋白はマルトースカラムを用いたアフィニティクロマトグラフィーにより精製された。本融合蛋白をマウスに免疫したところ,抗イヌIL-8抗体価の上昇がグルタチオン-S-トランスフェラーゼ(GST)-イヌIL-8融合蛋白を抗原としたELISAにより認められた。現在,MBP-イヌIL-8融合蛋白で免疫したマウスを用いて単クローン抗体を作成中である。

LPS stimulation し た healthy dogs often の knee nest リ ン パ festival origin 単 nuclear ball か ら spare し た mRNA よ り cDNA を synthetic し た. Type こ の cDNA を where と し て, ヒ ト IL - 8 cDNA の salt base with column を も と に cropping し た プ ラ イ マ ー を with い て PCR line を な い, イ ヌ イ ン タ ー ロ イ キ ン - 8 (IL - 8) cDNA に origin し, total protein コ ー を ド field containing む と think わ れ る, about 400 bp の バ ン ド が rights of さ れ た. こ の バ ン ド か ら have ら れ た ク ロ ー ン の salt column base with よ り, こ の ク ロ ー ン は ヒ ト, ウ サ ギ, ブ タ の IL - 8 cDNA と そ れ ぞ れ 76.5, 80.2, 87.0% の identity を す in 101 ア ミ ノ acid を コ ー ド す る こ と が わ か っ た. さ ら に, ら れ た ク ロ ー ン を pcDL - SRa296 発 now ベ ク タ ー に group み 込 み, MDCK cells お よ び Cos7 cell に import し た と こ ろ, そ の culture supernatant に は good on the ball go in sexual を induced す る active が Boyden chamber を - method using い た chemotaxis Assay に お い て recognize め ら れ, this ク ロ ー ン が functionary タ ン パ ク を コ ー ド す る こ と が shown さ れ た. Youdaoplaceholder0, ヌ ヌIL-8 CDNA を pMAL - cRI coliform 発 now ベ ク タ ー に サ ブ ク ロ ー ニ ン グ し, coliform DH5a strains に import し た と こ ろ, IPTG に よ り マ ル ト ー ス binding protein (MBP) と イ ヌ IL - 8 と が の fusion proteins produced さ れ, this protein は マ ル ト ー ス カ ラ ム を with い た ア フ ィ ニ テ ィ ク ロ マ ト グ ラ フ ィ Youdaoplaceholder0 によ によ refining された. This fusion protein を マ ウ ス に immune し た と こ ろ, anti イ ヌ IL - 8 antibody 価 の rise が グ ル タ チ オ ン - S - ト ラ ン ス フ ェ ラ ー ゼ (GST) - イ ヌ を IL - 8 fusion protein antigen と し た ELISA に よ り recognize め ら れ た. Now, the mBp-<s:1> ヌIL-8 fusion protein で immunization た た ウスを ウスを is prepared in the process of である て単 ロ ロ <s:1> <s:1> <s:1> を antibody を.

项目成果

松本安喜,他: "Molecular cloning and expression of canine interleukin 8 cDNA" CYTOKINE. 6. 455-461 (1994)

Yasuki Matsumoto 等人：“犬白细胞介素 8 cDNA 的分子克隆和表达”CYTOKINE。 6. 455-461 (1994)