イヌ組み換えIL-8による好中球のリーシュマニア原虫殺傷能の増強の試み

尝试使用犬重组IL-8增强中性粒细胞杀死利什曼原虫寄生虫的能力

• 批准号: 07760297
• 负责人: 松本 安喜
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07760297/
• 关键词: イヌ; サイトカイン; IL-8; レコンビナント; 好中球; 形態変化; 抗体; リーシュマニア

はじめに,生理活性を持つイヌIL-8 (cIL-8)の作製を行った.当初,マルトース結合蛋白(MBP)とcIL-8との融合蛋白(MBP-cIL-8)を作製・精製してそこからfactor XaによりcIL-8のみを切り出す予定であった.しかし,融合蛋白が酵素によって完全消化できないこと,および切り出されたcIL-8がクロマトグラフィーで融合蛋白と同じ分画に溶出されることから,cIL-8のみを精製することができなかった.そこで,大腸菌に導入し,グルタチオン-S-転移酵素(GST)とcIL-8の融合蛋白(GST-cIL-8)作製したところ,本蛋白は,factor Xaにより完全消化され,CMカラムにより,cIL-8のみの分画を得ることができた.得られたcIL-8を最終濃度が18ng/mlおよび180ng/mlとなるようにイヌ好中球に加えたところ,いずれの濃度においてもcIL-8の添加により好中球の形態変化が誘導され,得られたcIL-8生理活性を有することが示された.また,上記2つの融合蛋白を用いて,cIL-8に対するポリクローナル抗体(polyAb)およびモノクローナル抗体(monoAb)を作製した.polyAbは,ウサギをMBP-cIL-8で免疫し,その血清をGST-cIL-8を結合したセファロースカラムを通し,cIL-8に反応する抗体のみを精製した.得られたpolyAbは,ELISA法およびウエスタンブロッティング法においてcIL-8と反応し,さらに,ヒトIL-8とはELISAにおいてのみ反応した.また,このpolyAbは,cIL-8による好中球の形態変化は中和したが,ヒトIL-8による形態変化は中和しなかった.抗cIL-8monoAbは,マウスをMBP-cIL-8で免疫し,X63 Ag8ミエローマ細胞と融合し,得られたハイブリドーマ細胞の培養上清をGST-cIL-8抗原を用いたELISA法によりスクリーニングした.その結果,14クローンの抗cIL-8monoAb産生ハイブリドーマを得た.現在,抗cIL-8monoAbの中和活性,cIL-8測定系の確立およびcIL-8の好中球のリーシュマニア原虫貧食に対するcIL-8の効果を検討中である.

The physiological activity of IL-8 (cIL-8) was detected by PCR. At first, the fusion protein of MBP and cIL-8 (MBP-cIL-8) was prepared and purified. The fusion protein was digested completely by enzymes and purified by cIL-8. In this paper, E. coli was introduced into the production of GST and cIL-8 fusion protein (GST-cIL-8). The protein was digested completely by factor Xa,CM and cIL-8. The final concentration of cIL-8 was 18ng/ml to 180ng/ml, and the concentration of cIL-8 was increased to induce the morphological change of cIL-8. In addition, the fusion protein mentioned above was used to prepare cIL-8 antibody (polyAb) and cIL-8 antibody (monoAb).PolyAb was used to immunize MBP-cIL-8, and serum GST-cIL-8 antibody was purified. PolyAb,ELISA method, IL-8 and ELISA method. PolyAb,cIL-8,cIL-8, cIL-8 Anti-cIL-8monoAb was used to immunize MBP-cIL-8 cells. As a result, 14 cIL-8monoAb was produced. Now, the neutralizing activity of anti-cIL-8monoAb,cIL-8 assay was established and the effect of cIL-8 on the production of cIL-8 was investigated.

项目成果

松本安喜ら: "Morphological alternation of canine neutrophils induced with recombinant canine interleukin-8." J.Toxicol.Pathol.8. 239-244 (1995)

Yasuki Matsumoto 等人：“用重组犬白细胞介素 8 诱导犬中性粒细胞的形态学改变。J.Toxicol.Pathol.8 (1995)。”