遺伝子ノックアウトリーシュマニア原虫の作出および生ワクチンとしての有効性の検討

基因敲除利什曼原虫寄生虫的创建及其作为活疫苗的有效性评估

• 批准号: 12760197
• 负责人: 松本 安喜
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12760197/
• 关键词: リーシュマニア; Leishmania donovani; L. amazonensis; LACK; 遺伝子ノックアウト; 遺伝子クローニング; アンチセンス; リボザイム; L.amazonensis

遺伝子欠損リーシュマニァ原虫株を利用した弱毒生ワクチンは,病原性を獲得した復帰変異体が出現しないことから安全性の面で有望視されている.本研究の目的は,Leishmania homolog of Ckinase receptor (LACK)遺伝子ノックアウトリーシュマニア原虫を作製し,組み換え原虫の病原性・免疫原性等を検討し,ワクチンとしての可能性を探ることにあった.これまでに、L..donovaniおよびL..amazonensisプロマスティゴートより抽出した細胞DNAを用いたサザンブロット解析により,LACK遺伝子は,リーシュマニア原虫ゲノム中に2コピー存在することが示唆された.その後,MboI部分消化によりゲノムライブラリーを作成しているが,LACK遺伝子のクローニングには至らなかった.一方で,LACKはL. majorにおいて,マウスCD4陽性T細胞の標的分子の一つとして知られており,Th2誘導,Th1抑制を引き起こす事で病変悪化に関与するとされることから,L. amazonensis感染による病変形成へのLACKの関わりを調べた.原虫から得たmRNAを基にRT-nestedPCR法を行い,LACKcDNAの塩基配列を決定した.既知LACK(L. major, L. braziliensis, L. infantum, L. chagasi, L. donovani)との比較により,塩基配列で97.3%,アミノ酸配列で98.7%以上の相同性を認め,この蛋白が種内で高度に保存されている事が確認された.Laに感受性のBALB/cに,精製した組換えLACK蛋白を接種した群では,PBS(-)接種群に比べ,その後の原虫接種による病変形成の早期化と病態の悪化が認められた事から,LACK抗原が,Laを原因とする本症でも病態の悪化に関わる重要な原虫抗原であることが示唆された.この事から,Lm感染と同様に,LACK蛋白がLa感染においてもTh2誘導,Th1抑制により病変悪化に関与している可能性が考えられた.

It is expected that the protozoa strain will be infected by the attenuated virus and the pathogenicity of the protozoa. The purpose of this study was to investigate the possibility of pathogenicity and immunogenicity of protozoa in Leishmania homolog of Ckinase receptor (LACK). The parasite was analyzed by L..donovani, L..donovani, L..amazonensis, parasite, protozoa, protozoa, protozoa After the treatment, MboI partially digested the dough and made it into a dough, while LACK made it into a trickle. On the one hand, the molecules of LACK, L. major, Th2, Th2, and Th1 inhibit the development of disease, and the disease is caused by infection of amazonensis. The formation of disease causes LACK infection. The protozoa obtained the mRNA gene RT-nestedPCR method, and the LACKcDNA gene column determined the DNA content. Since it is known that LACK (L. major, L. braziliensis, L. infantum, L. chagasi, L. donovani) has been used for comparison, the base configuration is 97.3%, the aliphatic acid is more than 98.7% of the same concentration, the enzyme protein is highly conserved, and the LACK protein is sensitive to BALB/c, and the LACK protein is used to carry the cluster assay, and the PBS (-) is used for the cluster comparison. After infection, the protozoa were inoculated with the disease to form an early stage of disease, LACK antigen, La antigen, the cause of the disease, the disease of the disease, the infection of the important protozoa antigen, the cause of the disease. Lm infection is similar, LACK protein La infection induces Th2 infection, and Th1 inhibits the possibility of disease progression.

项目成果

奥野孝浩, 竹内誠, 大塚治樹, 松本芳嗣, 松本安喜: "Preteatment of Leishmania homologue of receptors for activated C kinase (LACK) promotes disease progression of leishmaniasis caused by Leishmania amazonensis"Experimental Animals. 51(3)(In press). (2002)

Takahiro Okuno、Makoto Takeuchi、Haruki Otsuka、Yoshitsugu Matsumoto、Yasuyuki Matsumoto：“激活 C 激酶 (LACK) 受体利什曼原虫同源物的预处理可促进亚马逊利什曼原虫引起的利什曼病的疾病进展”实验动物 51(3)（正在出版）。 （2002）