食べるワクチンを用いた,経口免疫によるTh1誘導とオーエスキー病ウイルス感染防御

使用可食用疫苗进行口服免疫诱导 Th1 并预防奥耶斯基病病毒感染

• 批准号: 14656112
• 负责人: 松本 安喜
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14656112/
• 关键词: オーエスキー病ウイルス; PrV; 粘膜免疫; 経口免疫; 細胞性免疫誘導; Th1; edible vaccine; コレラトキシン

オーエスキー病は,アルファヘルペス亜科に属するオーエスキー病ウイルス(PrV)の感染により発症するブタの感染症で,幼齢はしばしば致死性であり,また,妊娠豚では,死産・流産となる.成豚では,一過性症状を示すが,ウイルスキャリアーとなる.前年度は,オーエスキー病に対する経口免疫法の確立を目的とし,PrV感染細胞の経胃投与による免疫効果を検討し,オーエスキー病ウイルス(PrV)感染細胞の経口投与により,致死量のPrVウイルスの攻撃からマウスを防御できることを明らかにし,それが細胞性免疫誘導によることを示唆するデータを得た.本年度は,これらの結果を踏まえ,gDなどの単一PrV蛋白を用いて粘膜免疫によるTh1誘導を試み,さらに,PrV抗原遺伝子を実際に作物に導入し,得られた組換え植物を家畜に投与し,免疫原性を検討すると共に,PrV感染に対するワクチン効果を検討することを目標とした.はじめに,PrVのgD遺伝子フラグメントを得るため,PrV Bucharest株のBamHI-7(6.8kb)をBHVtkのBglII切断部位に挿入し,BamHIで切り出しpUC19プラスミドにサブクローニングしたpL19(大塚治城博士より分与)より,宝社製LA-Taqを用いてgDのアミノ酸コード領域を増幅し,pCR2.1にクローニングした.得られたgD遺伝子をEcoRIにより切断し,動物細胞発現用のpcDL-SRα296ベクターに挿入し,gDの発現を抗gD抗体で検出したところ,特異蛍光を認めず,得られたgD遺伝子に変異がある可能性が示唆された.gD遺伝子の塩基配列の確認を進めたが,GC含量が高く,最終的に塩基配列の確認に至らなかった.また,PrVの経鼻免疫により,CT非添加条件でも,抗体産生を誘導することを確認したが,致死量のウイルス感染に対しては,防御することは出来なかった.

The disease is caused by infection, and the fetus is fatal. Adult, transient symptoms are indicated. In the past year, the establishment of the immune method for the treatment of PrV infected cells has been studied. The immune effect of PrV infected cells has been studied. The lethal dose of PrV infected cells has been tested. This year, the results showed that PrV protein was used in mucosal immunity, Th1 induction, and PrV antigen gene was introduced into crops, resulting in the transformation of plants, livestock, immunogenicity, and PrV infection. PrV's BamHI-7(6.8kb) of PrV Bucharest strain was inserted into the BglII cleavage site of BHVtk,BamHI was cut out of pUC19 and pL19 (Dr. Otsuka Haruki) was cut out of pUC19. LA-Taq made by Baoshe was used to increase the amplitude of BamHI-7 (6.8kb) of PrV Bucharest strain. The pcDL-SRα296 gene for animal cell development was detected by EcoRI cleavage, and the detection of anti-gD antibodies was detected by specific fluorescence. The possibility of obtaining gD gene diversity was indicated by the confirmation of gD gene alignment. The GC content was high, and the final gD gene alignment was confirmed. In addition to the above conditions, antibody production was induced and confirmed, and the lethal dose of the virus was detected.