权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

タンパク質工学技術を利用したボツリヌス神経毒素の細胞膜通過機構の解析

利用蛋白质工程技术分析肉毒神经毒素的细胞膜通过机制

基本信息

批准号：
06760262
负责人：
鎌田洋一
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Osaka Prefecture University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ボツリヌス神経毒素は、N末端からL、H-1、H-2のドメインで構成されている。毒素は細胞膜上の受容体に結合後、細胞膜を通過して細胞内に侵入し、神経機能を障害する。毒素の細胞膜通過機構については不明な点が多い。そのメカニズムを明らかにするため、タンパク質工学の技術を利用して実験を行い、以下の成績を得た。1)ボツリヌス毒素が細胞膜を通過する際、細胞膜脂質に結合する過程および細胞膜に小孔(チャネル)を開ける過程があった。脂質膜との結合チャネル形成ともにpH4から5の酸性条件が必要だった。2)チャネル形成に関与する部分は、従来H-1ドメインであるとされていたが、精製したドメインを用いて実験したところ、世界に先駆けLドメインも関与することを明らかにした。3)毒素を脂質膜と反応させ、チャネル形成の条件下においた後、タンパク分解酵素(パパイン)処理を徹底的に行い、毒素分子中の脂質膜の外部に位置する部分を完全消化した。脂質膜中に残存する部分を、SDS電気泳動およびイムノブロッテイングで解析したところ、分子量2万から3万の複数のタンパク断片を得た。これらの断片には抗Lおよび抗H-1ドメイン抗体が反応した。以上の成績はボツリヌス毒素によるチャネル形成にはLおよびH-1ドメインそれぞれの一部分が関与する事を示している。4)上述のタンパク断片の部分アミノ酸配列を決定したところ、H-1およびLドメインのほぼ中央部分の一部の配列と一致した。現在ペプチド合成機によってこの断片の一部を合成しているところである。

ボツリヌス神経toxin は, N-terminal からL, H-1, H-2 のドメインで consists of されている. After the toxin binds to the receptor on the cell membrane, it invades through the cell membrane and into the cell, causing damage to the nervous system function. The mechanism by which toxins pass through cell membranes is unknown.そのメカニズムを明らかにするため、タンパク Mass Engineering のTechnology Utilization して実験を行い、The following results are obtained. 1) Toxins in the cell membrane pass through the pores in the cell membrane and are combined with the lipids in the cell membrane. The pores in the cell membrane are opened in the process. It is necessary for the lipid membrane to bind to the acidic conditions required to form the acidic conditions of pH 4 and 5. 2) チャネル Forming Seki and するPart は, H-1 ドメインであるとされていたが, Refined したドメインを用いて実験したところ, 世に前槆けLドメインも关 and することを明らかにした. 3) Under the conditions under which the toxins and lipid membranes are formed, the reaction enzyme and the enzyme are decomposed, and the enzyme is decomposed under the conditions where the toxin is formed.パイン) treatment is a thorough process, and the outer part of the lipid membrane in the toxin molecules is completely digested. The remaining part of the lipid membrane, the SDS electrophoresis methodグでanalytic したところ, molecular weight 20,000から30,000のplural のタンパクfragment を得た.これらの片にはanti-Lおよびanti-H-1ドメインantibody がanti-ぜした. The above results are the result of the poisonous poison and the formation of the poison. H-1 ドメインそれぞれのpart of the relationship and する事をshow している. 4) The above-mentioned のタンパク fragments are part of the アミノ acid arrangement したところ, and the central part of the H-1 およびLドメインのほぼ is consistent. Now the ペプチド synthesis machine is a part of the によってこの fragment and is synthesized into a しているところである.