グルタミン酸トランスポータファミリーの基質透過とチャネル形成の分子機房の解明

阐明谷氨酸转运蛋白家族底物渗透和通道形成的分子机制

• 批准号: 09257242
• 负责人: 金井 好克
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Kyorin University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09257242/
• 关键词: トランスポータ; グルタミン酸; アミノ酸; グルタミン酸トランスポータ; 輸送; クローニング; キメラ解析

グルタミン酸トランスポータファミリーは、酸性アミノ酸のトランスポータ(グルタミン酸トランスポータ)と中性アミノ酸のトランスポータからなる、Na^+共役トランスポータのファミリーである。その有機基質及び無機イオンの認識部位の同定のために、以下の検討を行った。1)グルタミン酸トランスポータEAAC1とGLT-1の系統的キメラのシステイン輸送能の解析を行い、基質アミノ酸側鎖認識部位がジヒドロカイニン酸認識部位とは異なり、C-末側の長く伸長した疎水性領域中に存在することを明らかにした。2)中性アミノ酸トランスポータASCT1とASCT2の系統的キメラを作製し、グルタミン輸送の有無を指標に基質結合部位のマッピングを行い、アミノ酸側鎖認識部位がC-末側の疎水性領域中に存在することを明らかにした。これは、1)のグルタミン酸トランスポータで得られた結果と矛盾しないものである。さらに、キメラのLi^+受容性とNa^+濃度依存性を解析し、二つのN^+結合部位のうち少なくとも一つはアミノ酸側鎖認識部位の近傍に存在することを明らかにした。また、トランスポータの機能発現における蛋白質/蛋白質相互作用の研究の端緒を掴む目的で、3)グルタミン酸トランスポータGLT-1のspliced variantのクローニングとその共発現を行い、異なるC-末を持つvariant同志の共発現が輸送のVmaxの上昇をもたらすことを明らかにした。さらに、4)アミノ酸輸送活性化因子4F2hcと共役するアミノ酸トランスポータのcDNAを発現クローニング法によりクローニングし、トランスポータの機能発現における蛋白質/蛋白質相互作用について、新しい視点を提出した。

In addition to the above, it is also possible to modify the composition of the acid mixture by modifying the composition of the acid mixture, and to modify the composition of the acid mixture. The organic matrix and inorganic matrix are discussed in the following ways: 1) The analysis of the transport energy of the system from EAAC1 to GLT-1 shows that there is a difference between the acid recognition site of the matrix and the acid recognition site of the C-terminal side, and the elongation of the C-terminal side exists in the aqueous domain. 2)The neutral acid chain reaction between ASCT1 and ASCT2 is controlled by the presence or absence of an indicator for the matrix binding site, and the acid chain reaction is recognized by the presence or absence of an indicator for the C-terminal aqueous domain. The results of this study were as follows: The Li^+ receptivity and Na^+ concentration-dependence were analyzed. The N^+ binding site was identified as a nearby site. The end of the study of protein/protein interactions in the functional development of protein groups is aimed at 3) the development of protein/protein interactions in spliced variants of GLT-1, and the rise in Vmax of co-development and transport of heterosexual variants. 4) A new viewpoint on protein/protein interaction is proposed for the development of cDNA for acid transport activation factor 4F2hc.

项目成果

金井 好克: "分子医科学で病気を識るシリーズ5、チャネルとトランスポータその働きと病気:アミノ酸トランスポータとその異常による疾患" メジカルビュー社, 25 (1997)

Yoshikatsu Kanai：“用分子医学科学系列 5 了解疾病，通道和转运蛋白、其功能和疾病：氨基酸转运蛋白及其异常引起的疾病” Medical View Publishing，25 (1997)

Utsunomiya-Tate,N.: "Tissue specific variants of glutamato Transporter GLT-1." FEBS Letters. 416. 312-316 (1997)

Utsunomiya-Tate,N.：“谷氨酸转运蛋白 GLT-1 的组织特异性变体。”

Shayakul,C.: "Localization of the high-affinity glutamato transporter EAAC1 in rat kidney." Am.J.Physiol.(in press). (1998)

Shayakul,C.：“高亲和力谷氨酸转运蛋白 EAAC1 在大鼠肾脏中的定位。”

Kanai,Y.: "Substrate binding sites of glutamate transporters and structurally related neutral amino acid transporters." Jpn.J.Physiol.47. S55-S56 (1997)

Kanai,Y.：“谷氨酸转运蛋白和结构相关的中性氨基酸转运蛋白的底物结合位点。”

Endou,H.: "A Nobel Na^+-dependent transporter with a high-affinity to glutamine." Contrib.Nephrol.121. 31-36 (1997)

Endou,H.：“一种与谷氨酰胺具有高亲和力的 Nobel Na^ 依赖性转运蛋白。”