インターロイキン1受容体を介するシグナル伝達機構の解析

IL-1受体介导的信号转导机制分析

• 批准号: 06770240
• 负责人: 久野 耕嗣
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770240/
• 关键词: IL-1; TNF; シグナル伝達; 酸性スフィンゴミエリナーゼ; セラミド; ニーマンピック病; NFκB

最近IL-1,TNF刺激によりスフィンゴミエリンの分解とセラミドの生成が促進されることが報告され、また異なるグループにより中性および酸性スフィンゴミエリナーゼのIL-1/TNFシグナル伝達への関与を示唆する報告がなされている。このうちSchutzeら(CELL,71,765,1992)はTNFによるNFκBの活性化に、PC-PLCによるDAGの生成と酸性スフィンゴミエリナーゼの活性化が重要であると報告している。本研究では、酸性スフィンゴミエリナーゼの欠損による先天性代謝異常疾患として知られるニーマンピック病(NPD)タイプA患者由来の線維芽細胞を用い、IL-1,TNFによるIL-8遺伝子の活性化における酸性スフィンゴミエリナーゼの役割を検討した。タイプA-NPD由来線維芽細胞株は、National Institute of the Geberal Medical Sciences Human Genetic Mutant Cell Repositiryより2株取りよせ、また岐阜大学小児科教室で樹立された1株を加えた。これら3つのタイプA-NPD由来線維芽細胞株についてその酸性スフィンゴミエリナーゼ活性を確認したところ、正常の線維芽細胞と比較して1%以下であった。実験としては、タイプA-NPDおよび正常線維芽細胞をIL-1またはTNFの存在下で24時間培養し、培養上清中のIL-8蛋白の濃度をELISA法を用いて測定した。またIL-1,TNF刺激後のIL-8mRNAのレベルはノーザンブロット法により調べた。その結果、上記の3つのタイプA-NPD線維芽細胞株において、IL-1およびTNF刺激により顕著なIL-8の産生が誘導されることがわかった。また、このうち2つのタイプA-NPD細胞株については、ノーザンブロットにおいて、IL-1またはTNF刺激2時間後に、顕著なIL-8 mRNAの誘導がみられることを確認した。IL-1,TNFによるIL-8遺伝子発現誘導にはNFκBの活性化が重要であることが示唆されているため、次にIL-8遺伝子上流域のNFκB結合部位をプローブに用いてゲルシフト法によりNPD線維芽細胞でのNFκBの活性化を調べた。その結果、タイプA-NPD線維芽細胞においても、正常細胞と同程度にIL-1,TNFによるNFκBの活性化が起こることがわかった。またRelファミリー分子に対する抗体を用いたスーパーシフトアッセイの結果から、p65とp50が、タイプA-NPD線維芽細胞において検出されるκB複合体の主なコンポーネントであることがわかった。以上の様に、酸性スフィンゴミエリナーゼを欠損するタイプA-NPD線維芽細胞においては、正常細胞と同程度にIL-1,TNFによるIL-8遺伝子の活性化、NFκBの活性化が起こることがわかった。このことから、少なくとも線維芽細胞においても、酸性スフィンゴミエリナーゼ経路は、IL-1またはTNFによるNFκBの活性化を介したIL-8遺伝子の活性化に必須ではないことが示唆された。中性スフィンゴミエリナーゼについては、その特異的阻害剤が見い出されていないため、現在のところIL-8遺伝子発現誘導におけるその役割を調べることは難しい。今後、中性スフィンゴミエリナーゼ活性化経路の解析とその上流に対する特異的阻害剤を用いることにより、セラミドをセカンドメッセンジャーとする経路がどの程度IL-1,TNFによるサイトカイン遺伝子の活性化に関与するかが明らかになると思われる。

Recently, IL-1, TNF stimulates the decomposition and production of IL-1 and stimulates the production of IL-1, and promotes the production of IL-1 and TNF. Neutral acidic acidic acidic IL-1 /TNF シグナル伝达への关与を志憆する Report がなされている.このうちSchutzeら(CELL,71,765,1992)はTNFによるNFκBのactivationに、 PC-PLC DAG generation and activation of acidic acid is an important report. This study is based on the innate metabolism of acidic acidic steroids. Abnormal disease: Nectar's disease (NPD) A patient The origin of the fibroblasts, IL-1, TNF, IL-8 and IL-8 are activated by acidic acidic enzymes. A-NPD is derived from the line Mutant Cell Line, the National Institute of the Geberal Medical Sciences Human Genetic Mutant Cell Repository, and the National Institute of the Geberal Medical Sciences Human Genetic Mutant Cell Repository.これら3つのタイプA-NPD is derived from the line of vitamin B cell strain についてそのAcidic スフィンゴミエThe activity of リナーゼを has been confirmed, and the normal fibroblast cells have been compared to be less than 1%.実験としては、タイプA-NPD およびNormal line fibroblast cells をIL-1 またはTNFのThe concentration of IL-8 protein in the culture supernatant was measured using ELISA method after 24-hour culture.またIL-1, IL-8mRNA のレベルはノーザンブロット法によりtone after TNF stimulation.そのRESULTS, の3つのタイプA-NPD line dimensional sprout cell line において, IL-1 TNF stimulates the production of IL-8 and induces the production of IL-8.また、このうち2つのタイプA-NPD cell line については、ノーザンブロットにおいて、IL-1またはTNF stimulation 2 hours laterに、镕敕なIL-8 The induction of mRNA has not been confirmed. IL-1, TNF and IL-8 are important in inducing the activation of NFκB. 8. The NFκB binding site in the upper basin of the gene was activated and adjusted using the NPD line-based NFκB binding site. As a result, the activation of IL-1 and TNF by NFκB was activated to the same extent by A-NPD cells and normal cells.またRelファミリーmolecule に対するantibodyを用いたスーパーシフトアッセイのRESULTSから、p65とp50が、タイプA-NPD line dimensional bud cell において検出されるκB complex の主なコンポーネントであることがわかった. The above の様に, acidic スフィンゴミエリナーゼを defective するタイプA-NPD line dimensional sprout cells においては, normal cells To the same extent, IL-1, TNF and IL-8 are activated, and NFκB is activated and activated.このことから, 小なくとも线dimensional bud cell においても, acidic スフィンゴミエリナーゼ経路は, IL-1 またThe activation of TNF and the activation of NFκB are necessary for the activation of IL-8 and the activation of IL-8. Neutral Sensorめ、Now the IL-8 legacy is induced by the IL-8 におけるその乒动べることは恗い. From now on, analysis of the neutral スフィンゴミエリナーゼactivation path and the upstream The special blocking agent of the に対するいることにより, セラミドをセカンドメッセンジャーとする経路がどの级IL-1,TNFによるサイトカイン伝子のactivation link and するかが明らかになると思われる.

项目成果

Ishikawa Y.et al.: "Establishment of LPS-dependent nuclear factor kappa B activation in a cell-free system." J.Biol.Chem.(in press). (1995)

Ishikawa Y.et al.：“在无细胞系统中建立 LPS 依赖性核因子 kappa B 激活。”

Murayama,T.et al.: "Enhancement of human cytomegarlovirus replication in human lung fibroblastc ell line by interlekin 8." J.Virology. 68. 7582-7585 (1994)

Murayama,T.et al.：“Interlekin 8 增强人肺成纤维细胞系中人巨细胞病毒的复制。”

Yasumoto K.et al.: "Molecular analysis of the cytokine network involved in cachexia in colon 26 adencocarcinoma-bearing mice." Cancer Research. 55. 921-927 (1995)

Yasumoto K.等人：“对患有结肠 26 腺癌的小鼠恶病质所涉及的细胞因子网络进行分子分析。”

Kuno,K.et al.: "Acid sphingomyelinase is not essential for IL-1 and TNF receptor signaling pathway leading to NFκB activation." Int.Immunol.6. 1269-1272 (1994)

Kuno, K. 等人：“酸性鞘磷脂酶对于导致 NFκB 激活的 IL-1 和 TNF 受体信号通路不是必需的。”1269-1272 (1994)

Harada A.et al.: "Molecular cloning of cDNA encoding mouse interleukin-8(IL-8)receptor." Gene. 142. 297-300 (1994)

Harada A.等人：“编码小鼠白细胞介素 8 (IL-8) 受体 cDNA 的分子克隆。”