炎症時に発現される新しいADAMファミリー遺伝子ADAMTS-1の機能発現解析

ADAMTS-1（一种在炎症过程中表达的新 ADAM 家族基因）的功能表达分析

• 批准号: 09770214
• 负责人: 久野 耕嗣
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770214/
• 关键词: ADAM; メタロプロテアーゼ; 細胞外マトリックス

ADAM(A Disintegrin And Metalloproteinase)はヘビ毒メタロプロテアーゼおよびディスインテグリン群と相同性を示す遺伝子の総称である。我々は癌悪液質誘導性のマウスcolon26腫瘍で高発現する遺伝子として、新規のADAMファミリー遺伝子、ADAMTS-1を同定し(Kuno K.et al.,1997)、その解析を行っている。ADAMTS-1は他のADAMファミリー分子とは異なり、膜貫通領域を持たず、そのかわりに3つのトロンボスポンジン(TSP)タイプIモチーフを有するユニークなADAMファミリー分子である。本年度はCOS-7細胞発現系を用いADAMTS-1蛋白の分泌性等の基本的性質について調べた。その結果、COS-7細胞発現系では、ADAMTS-1蛋白は分泌性であるにもかかわらず、その培養上清中にほとんど検出されないことがわかった。その後、これはADAMTS-1蛋白が細胞外マトリックスに取り込まれるためであることがわかった。この時、ADAMTS-1蛋白は、プロドメインを有する前駆体およびプロドメインが除去された成熟型として細胞外マトリックス分画に検出される。またヘパリン存在下で同様に発現を行った場合、ADAMTS-1蛋白は細胞外マトリックスからはずれて、培養上清中に放出されることがわかった。このことから、ADAMTS-1蛋白はヘパラン硫酸等の硫酸化多糖を介して細胞外マトリックスに結合すると考えられる。さらに同タンパクのECM結合領域を調べるため、種々の部分欠損変異体を作製して解析した結果、C末端領域の3つのTSPタイプIモチーフおよびその間のスペーサー領域が、それぞれECM結合能を有することがわかった。以上のことから、ADAMTS-1蛋白は、細胞から分泌された後、C末端側領域における複数のECM結合部位を介して産生細胞のECMに取り込まれる一方、プロテアーゼ部分はフリーの状態であることが示唆された。

ADAM(A Disintegrin And Metalloproteinase) is a new type of protein. We have identified ADAM gene, ADAMTS-1 and ADAMTS-1 as the most common genes in cancer induced tumors (Kuno K.et al., 1997)The analysis of the company is carried out in a timely manner. ADAMTS-1 has ADAM sub-components, membrane pass-through domains, and other sub-components. This year, the COS-7 cell development line was used to adjust the basic properties of ADAMTS-1 protein such as secretion. Results: COS-7 cell development line, ADAMTS-1 protein secretion, culture supernatant, production line, ADAMTS-1 protein secretion, culture supernatant, production line, ADAMTS-1 protein secretion. ADAMTS-1 protein is produced in vitro. At this time, ADAMTS-1 protein was detected in the mature and extracellular forms except for the precursor and precursor forms. ADAMTS-1 protein was released from culture supernatant in vitro. ADAMTS-1 protein is mediated by sulfated polysaccharides such as sulfuric acid. In addition, the ECM binding domain of the same type can be adjusted, and the partial loss of the species can be controlled. The analysis results show that the TSP of the C-terminal domain can be adjusted, and the ECM binding domain can be adjusted. ADAMTS-1 protein is secreted by the cell, and the C-terminal domain contains a plurality of ECM binding sites that mediate the production of the cell's ECM.

项目成果

Kuno K.et al.: "The exon-intron organization and chromosomal mapping of the mouse ADAMTS-1 gene encoding an ADAM family protein with TSP motifs." Genomics. 46. 466-471 (1997)

Kuno K.等人：“编码具有 TSP 基序的 ADAM 家族蛋白的小鼠 ADAMTS-1 基因的外显子-内含子组织和染色体定位。”

Kuno K.et al.: "ADAMTS-1 protein anchors at the extracellular matrix through the thrombospondin type I motifs and its spacing region." J.Biological Chemistry. 273. 13912-13917 (1998)

Kuno K.等人：“ADAMTS-1 蛋白通过 I 型血小板反应蛋白基序及其间隔区域锚定在细胞外基质上。”

Sonoda Y.et al.: "Stimulation of interleukin-8 production by okadaic acid and vanadate in a human promyelocyte cell line,an HL60 subline." J.Biol.Chem.272. 15366-15372 (1997)

Sonoda Y. 等人：“在人类早幼粒细胞系（HL60 亚系）中，冈田酸和钒酸盐刺激白细胞介素 8 的产生。”

Kuno K.et al.: "Moleucular cloning of a gene encoding a new type of metalloproteinase-disintegrin family protein with thrombospondin motits as an inflammation assoctated gene." J.Biol.Chem.272. 556-562 (1997)

Kuno K.等人：“编码新型金属蛋白酶解整合素家族蛋白的基因的分子克隆，其血小板反应蛋白基序作为炎症相关基因。”