炎症時に発現されるADAMTS1遺伝子のトランスジェニックマウスの作製と解析

炎症期间表达的 ADAMTS1 基因转基因小鼠的产生和分析

• 批准号: 10163216
• 负责人: 久野 耕嗣
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10163216/
• 关键词: ADAM; メタロプロテアーゼ; 細胞外マトリックス; α_2-マクログロブリン

ADAM(A Disintegrin And Metalloproteinase)はヘビ毒メタロプロテアーゼおよびディスインテグリンと相同性を示す遺伝子群の総称である。我々はトロンボスポンジン(TSP)タイプIモチーフを有するユニークなADAMファミリー分子、ADAMTS-1を同定し、(Kuno K.et al.,1997)、その解析を行っている。今回、ADAMTS-1遺伝子の炎症における役割を調べる目的で、同遺伝子を過剰発現するトランスジェニックマウスの作製、解析を行っているが、この課題は現在進行中であるため、同時に進めていたADAMTS-1の細胞外マトリックス(ECM)結合領域の解析およびプロテアーゼ活性の解析結果について報告する。まずCOS-7細胞発現系を用いてADAMTS-1の分泌性等について調べた結果、ADAMTS-1がECM結合性であることが明らかとなった。また種々の部分欠損変異体を作製して解析した結果、ADAMTS-1の末端側領域のうち、3つのTSPタイプIモチーフおよびその間のスペーサー領域が、それぞれ独自にECM結合能を有することがわかった。一方、プロテアーゼインヒビターであるα_2-マクログロブリン(α2M)とプロテアーゼとの複合体形成は、そのプロテアーゼ活性に依存的であることが知られていることから、ADAMTS-1のα2Mとの複合体形成能を調べた。その結果、COS-7細胞で発現したADAMTS-1はα2Mと200kDa前後の高分子量の複合体を形成する活性があることがわかった。またADAMTS-1のZn結合モチーフにおける変異体ではα2Mとの複合体形成能が失われることがわかり、これらの結果からADAMTS-1が活性型のメタロプロテアーゼドメインを有することが示唆された。以上のことから、ADAMTS-1はECM結合性のメタロプロテアーゼであることがわかった。

ADAM (A Disintegrin And Metalloproteinase) は ヘ ビ poison メ タ ロ プ ロ テ ア ー ゼ お よ び デ ィ ス イ ン テ グ リ ン と identity を shown す heritage 伝 subgroup の 総 said で あ る. I 々 は ト ロ ン ボ ス ポ ン ジ ン (TSP) タ イ プ I モ チ ー フ を have す る ユ ニ ー ク な ADAM フ ァ ミ リ ー molecules, with fixed し を ADAMTS - 1, (Kuno Kevin Everett sat t al., 1997), そ の parsing line を っ て い る. Today back to inflammation, but 伝 ADAMTS - 1 の に お け る "を cutting adjustable べ で る purpose, with son survived 伝 を turning 発 now す る ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス の cropping systems, analytical を っ て い る が, こ の subject は now underway で あ る た め, at the same time に into め て い た ADAMTS - 1 の extracellular マ ト リ ッ ク ス の (ECM) combined with field Analysis of およびプロテア およびプロテア ゼ activity <s:1> analysis results に て て て report する. ま ず COS 7 cells 発 department を now using い て ADAMTS - 1 の secretory etc に つ い て adjustable べ た results, 1 が ECM ADAMTS - associative で あ る こ と が Ming ら か と な っ た. ま た kind 々 owe loss - foreign を の parts of the system し て parsing し た の end side of the field results, ADAMTS - 1 の う ち, 3 つ の TSP タ イ プ I モ チ ー フ お よ び そ の between の ス ペ ー サ ー が, そ れ ぞ れ に ECM binding energy alone を have す る こ と が わ か っ た. Side, プ ロ テ ア ー ゼ イ ン ヒ ビ タ ー で あ る alpha _2 - マ ク ロ グ ロ ブ リ ン (alpha 2 m) と プ ロ テ ア ー ゼ と の complex formation は, そ の プ ロ テ ア ー ゼ active に dependent で あ る こ と が know ら れ て い る こ と か ら の alpha 2, ADAMTS - 1 m と の complex formation to を べ た. そ の results, COS 7 cells で 発 now し た は ADAMTS - 1 alpha 2 m と の high molecular weight before and after 200 kda の complex を form す る active が あ る こ と が わ か っ た. ま た の ADAMTS - 1 zinc combination モ チ ー フ に お け る - variant で は alpha 2 m と の complex formation can が lost わ れ る こ と が わ か り, こ れ ら の results か ら が ADAMTS - 1 type reactive の メ タ ロ プ ロ テ ア ー ゼ ド メ イ ン を have す る こ と が in stopping さ れ た. The above <s:1> と ら ら, ADAMTS.1 <s:1> ECM binding <s:1> メタロプロテア ゼである ゼである とがわ とがわ った った った.

项目成果

Kuno K.et al.: "ADAMTS-1 protein anchors at the extracellular matrix through the thrombospondin type I motifs and its spacing region." J.Biological Chemistry. 273. 13912-13917 (1998)

Kuno K.等人：“ADAMTS-1 蛋白通过 I 型血小板反应蛋白基序及其间隔区域锚定在细胞外基质上。”