微分表示法による肝癌発癌に関与する癌関連遺伝子の検索

利用差异表达法寻找参与肝癌癌变的癌症相关基因

• 批准号: 06770366
• 负责人: 花房 直志
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770366/
• 关键词: 微分表示法; 肝癌; HBV; 癌関連遺伝子; HuH-7

この研究は微分表示法(Differential Display)によって肝癌の発症に関与する癌関連遺伝子を検索することを主な目的としている。特に発癌との関連からB型肝炎ウイルス(HBV)の感染により発現に変化を引き起こす遺伝子に強い興味を持ち研究を行った。(1)培養細胞を用いた実験:HuH-7にHBVゲノムをトランスフェクションし、微分表示法でHBV遺伝子の発現の有無による変化を検討した。数回の実験の結果、再現性を持って検出されたバンドの出現と消失を観察した。それぞれ数個ずつクローニングし、塩基配列の決定を行ったが、HBV関連遺伝子の他は非特異的なバンドであると予想された。一過性のトランスフェクションにおいてもHBV遺伝子の発現を検出できたことから微分表示法の有用性が示唆された。X遺伝子の発癌への関与が強く示唆されていることから、HBVのX遺伝子のみを発現する細胞株(I)と、X遺伝子以外を発現する細胞株(II)を作成し、微分表示法での検討を試みた。(II)の細胞株の作成は成功したが、(I)の細胞株の作成には、いまだ成功せず現在も継続して実験を行っている。(I)の細胞株については、コロニーの生育が異常に遅く、途中で死滅することから、X遺伝子の発現による生育阻害作用が予想された。(2)肝癌組織を用いた実験:手術的に単離された肝癌組織と、その非癌部を用いて、微分表示法により検討を行った。肝癌組織由来のRNAの分解の程度の差異によるためか、なかなか再現性を持ったバンドの出現と消失が観察されなかったが、Rb類似タンパク質p130に相同性を持つ未知遺伝子や、その他数種の未知遺伝子に変化が観察されている(第31回日本肝臓学会総会発表予定)。今後さらにHBV、HCVの感染の有無に分類し、例数を重ね検討を行う予定である。

This study aims at Differential display to investigate the relationship between liver cancer and cancer related genes. The development of hepatitis B virus (HBV) infection is an important part of the study. (1)The development of HBV gene in HuH-7 cells was studied by differential expression. The number of results, reproducibility, and the appearance and disappearance of the sample were observed. There are a number of different types of HBV related genes, such as HBV, HBV. The usefulness of differential representation for detection of HBV gene is demonstrated in this paper. The relationship between the development of X-gene and the expression of X-gene in HBV cell line (I) and the development of X-gene in HBV cell line (II) was studied by differential expression. (II)The production of the cell line is successful.(I) The production of the cell line is successful. (I)The growth inhibition effect of cell lines on reproduction is expected to be abnormal, death on the way, and development of X genes. (2)Liver cancer tissue analysis: surgical separation of liver cancer tissue analysis, differential representation of liver cancer tissue analysis The differences in the degree of RNA decomposition in liver cancer tissue origin, reproducibility, persistence, appearance, disappearance, similarity, identity, unknown genes, and transformation of several other unknown genes were observed (Table proposed by the 31st Japan Liver Science Society). In the future, the classification and number of HBV and HCV infections will be discussed again.