RLGS法による肝癌染色体DNAの解析

RLGS法分析肝癌染色体DNA

• 批准号: 08770362
• 负责人: 花房 直志
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770362/
• 关键词: 肝癌; RLGS; ゲノムメチレーション

ゲノムの詳細な情報を1度の解析により得ることができるすぐれた特徴をもつRLGS(Restriction Landmark Genomic Scanning)法を用い、肝がん(HCC)の癌部と非癌部とを比較した。我々はHCCで共通に見られるスポットの変化が多数存在する事、幾つかの特徴的な変化が見られることを第31回日本肝臓学会(1995年)で報告した。本研究では、RLGS法を真に有効な染色体の解析法とするため、肝がんで変化の見られたものを中心にRLGSプロファイルの各スポットを染色体上にマップする手法を開発することを主要な目的とした。1:RLGS法の最適化:第11回基礎生物学研究所バイオサイエンストレーニングコースに参加し、より簡便かつ精密に多数の試料を解析可能な手法を習得した。現在はこの手法を用いて解析を行っている。2:ランドマークスポットのピックアップ:数千のスポットを全て取り扱うことは実際的にはできない。特にHCCで特異的に変化の見られるスポットをこれまでの10数例の解析から明らかにしたので、これらを特に重点的に解析した。3:RLGSスポットクローニング法の改良:鈴木らにより報告されたPCR法を用いたクローニング法を元にラベリングとアダプターに改良を加え、1度の電気泳動でクローニング可能な手法を開発した。多数の試料を並べ比較することが必要なうえ、限られた試料しか手に入らない臨床材料を用いた研究では最も必要な技術であり、この改良により研究の効率化が可能となった。4:スポットの配列決定:単離されたスポットの断片をPCRで増幅し直接部分的配列決定を行った。さらにいくつかのスポットについてはベクターへのクローニングを行った。配列が決定されたスポットのいくつかについては Radiation hybird パネルを用いた染色体マッピングを試みた。HCCにおいて新たに出現したスポットの多くは反復配列のメチル化状態の変化によるものであること、マイクロサテライトの複製エラー(RER)によると思われるスポットの変化を検出したこと等、新たな知見がいくつか得られた。これらについては第33回日本肝臓学会(1997年4月)において発表する予定である。

The detailed information of the liver is analyzed in the first degree, and the characteristics of the liver are compared between the cancerous part and the non-cancerous part of the liver (HCC). The 31st Japanese Liver Society (1995). The main purpose of this study is to develop the RLGS method for chromosome analysis. 1: Optimization of the RLGS method: 11th chapter Institute of Basic Biology, Inc. Now the method is used to analyze the line. 2: The number of people who are interested in the game: thousands of people. The analysis of 10 cases of HCC is very important. 3: Improvement of RLGS method: Suzuki reported PCR method was improved by adding 1 degree of electromobility to the PCR method. Most of the samples were compared and analyzed, and the results were analyzed and analyzed. 4: The allocation decision of the group: the allocation decision of the group: the allocation decision of the direct part of the PCRさらにいくつかのスポットについてはベクターへのクローニングを行った。The arrangement of the chromosome is determined by the Radiation hybird. HCC is new to the occurrence of multiple changes in the state of repeated allocation of information, such as changes in the state of information, etc. The 33rd Japanese Liver Society (April 1997)