肝炎の治療を目的とする遺伝子改変B型肝炎ウイルスの構築

用于治疗肝炎的转基因乙型肝炎病毒的构建

• 批准号: 05857063
• 负责人: 花房 直志
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05857063/
• 关键词: HBV; ベクター; リボザイム; アンチセンスDNA

この研究はB型肝炎の治療に利用可能な遺伝子改変B型肝炎ウイルス(HBV)ベクターの構築を目的としている。ヒトに対する病原性の問題から、in vivoでは増殖しないようにするため、P遺伝子の温度感受性変異の導入を最初の目的とした。しかしながらin vitroでのHBVの複製にX遺伝子が不要であること、逆にin vivoでの複製にはX遺伝子は必須であること等が最近の知見から明らかになった。従って当初の目的はX遺伝子を破壊することによって可能である事が解り、P遺伝子への変異の導入に関する実験は途中で中止された。遺伝子改変HBVベクターの構築のため、まず約60塩基対の合成DNAリンカーをP遺伝子のC末端側に挿入したHBV配列(HBVL60:3284bp)を作成した。HBVL60は完全なPreC,C,PreS,S,およびP遺伝子を持つが、X遺伝子はリンカーの挿入により破壊されている。HBVL60を基に作成した種々のプラスミドの培養細胞における複製を調べた結果、肝ガン由来のHuH-7においてHBVL60ダイマーは複製可能であること、HepG2においてもトランスでX遺伝子を供給するとHBVL60ダイマーは複製可能である事を示した。従ってHBVは少なくとも63塩基対の異種DNAを運ぶことが可能であることが明らかにされた(学会および報文にて発表準備中)。またHepG2での結果からHBVL60ダイマーはin vivoでは複製能を持たないことが予測された。HBVL60を基にクローニング部位を持つベクターpGHBV501を作成したので、今後はHBV遺伝子の各種変異の単離、HBVのパッケージング可能なDNAのサイズの検討、リボザイムやアンチセンスDNAを用いた野生型HBVの複製に及ぼす影響等を検討していく予定である。

To study the treatment of hepatitis B virus (HBV), use the possibility to change hepatitis B virus infection (HBV) to hepatitis B virus infection (HBV). The pathogenicity problem, the in vivo infection rate, the temperature sensitivity test and the temperature sensitivity test were detected in the first step. You need to know that you are not aware of the recent information, such as the in vitro copy, the in vivo copy, the copy. In the first place, it was possible that the matter was solved, and the accident was halted on the way. The HBV was changed into the HBV array (HBVL60:3284bp) to make a synthetic DNA. The C-terminal was inserted into the HBVL60:3284bp. HBVL60 is full of PreC,C,PreS,S, while the child is holding the phone, and the X child is breaking the price. The HBVL60 system is used to copy the results of a variety of cell copies, the cause of the liver is to copy the results of the HBVL60, it is possible to make a copy of the HBVL60, and the HepG2 file is used to make a copy of the HBVL60 file. It is possible to change the number of HBV files in the basic DNA system (learn how to prepare the report form). The results of the HepG2 experiment show that the copy of the HBVL60 file will be able to transfer the data to the server. In the future, the HBVL60 virus may be used as a copy of the DNA, and the wild type HBV copy and shadow will be used to determine the accuracy of the DNA system.