肝細胞間の接着解徐と肝細胞-基質間の接着によるチロシンキナーゼとPLCγの活性化

由于肝细胞之间的粘附以及肝细胞与基质之间的粘附的释放而激活酪氨酸激酶和PLCγ

• 批准号: 06770398
• 负责人: 高橋 正明
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770398/
• 关键词: 肝細胞; 細胞接着; チロシンキナーゼ; PLC_γ

肝細胞間の接着解除と肝細胞-基質間の接着により、イノシトールリン脂質系の代謝が促進される成績を得ている。この機序の解明のため、細胞間接着の解除(カドヘリン関与)と細胞-基質間の接着(インテグリン関与)により、チロシンキナーゼの活性化が起き、それに伴ってPLC_γが活性化され、イノシトールリン脂質代謝が促進されるかどうかについて検討を行なった。ラットを用いてコラゲナーゼ潅流法にて肝細胞を分離、培養を行った。肝細胞と基質との接触は、肝細胞のcollagen-coated dishへの播種により行ない、肝細胞間の接触の解除は、24時間培養後のconfluentになった細胞の外液からのCa^<2+>の除去によった。それらの細胞のcytosol分画を用いて、チロシンキナーゼ活性の測定をProtein Tyrosin Kinase Assay Systemを用い、PLC_γのチロシンリン燐酸化の検出は、抗PLC_γ抗体で免疫沈降された蛋白をWestern blot法を用いて抗フォスフォチロシン抗体をprobeとして行なった。細胞内IP_3濃度の測定は、脂質分画においてIP_3 Assay Systemにて測定した。肝細胞と基質との接触により、チロシンキナーゼ活性は約3倍に増加し、チロシンリン酸化PLC_γの軽度の増加と、細胞内IP_3の有意な増加を認めた。肝細胞間接着の解除では、チロシンキナーゼ活性とチロシンリン酸化PLC_γに有意な増加はみられなかったが、細胞内IP_3濃度は軽度の増加を認めた。以上の成績より、イノシトールリン脂質代謝は、肝細胞と基質との接触によりPLC_γのチロシンリン酸化により促進され、肝細胞間接着の解除では他のPLCの活性化により促進されると推察された。

In addition, the liver cell-matrix adhesion and the metabolism of lipid system are promoted. The mechanism of this process is explained, the cell-to-cell adhesion is released, the cell-to-matrix adhesion is activated, the PLC_γ is activated, the lipid metabolism is promoted, and the cell-to-matrix adhesion is activated. Liver cells were isolated and cultured using the flow method. Contact of hepatocyte matrix, seeding of hepatocyte collagen-coated dish, release of hepatocyte contact, confluent of hepatocyte extracellular fluid after 24 hours of culture, removal of Ca^<2+>. Cytosol analysis of cells was performed using the Protein Tyrosin Kinase Assay System, PLC_γ phosphorylation assay, anti-PLC_γ antibody immunoprecipitation protein Western blot, and anti-PLC_γ antibody probe. Determination of intracellular IP_3 concentration and lipid profile in IP_3 Assay System The increase of intracellular IP_3 and the increase of PLC_γ and the increase of intracellular IP_3 activity were also recognized. The release of adhesion between hepatocytes is due to the intentional increase in chitinase activity and chitinase acidification PLC_γ, and the increase in intracellular IP_3 concentration. The above results indicate that lipid metabolism, hepatocyte matrix contact, PLC acidification, hepatocyte adhesion release, and PLC activation are promoted.