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Duchenne型筋ジストロフィー筋に存在するいわゆるrevertant fiberの解析-その出現機構解明と治療への応用の可能性-

分析杜氏肌营养不良症肌肉中存在的所谓回复纤维 - 阐明其出现机制和治疗应用的可能性 -

基本信息

批准号：
06770460
负责人：
平沢恵理
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Juntendo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.ジストロフィンの異なるドメインに対して作製された6種類の抗体を用いた免疫組織化学染色を施行しRFに存在するジストロフィン蛋白が全長を有する完全なものかあるいは一部分を欠く不完全なものかを観察するとともにその出現頻度を検討した。ここで出現頻度の年齢との相関性、遺伝子異常の種類との関連を検討した。2.次に、遺伝子欠失の判明しているDMD筋からジストロフィン陽性のRFとジストロフィン陰性の筋線維を切片から取りだし、各々直接Polimerase chain reaction(PCR)増幅した.これにより、RFにおけるジストロフィン遺伝子の異常を欠失例5例について検討し,RFにおいても欠失が存在することを示した.即ち,体細胞モザイシズムではないこと,欠失修復はないことを示した.3.次に,mRNAの検討を加えた.ジストロフィンmRNAをRT-PCR法にてcDNAとして増幅し、この塩基配列を決定し,readig frameのshiftが修正するようなsplicingの存在を明らかにした.4.そこで,このsplicing機構の変化を応用した治療を着想しその可能性を探ることにした。そこでこのsplicing機構をmdx筋の培養系,及びin vivoの実験系に持ち込み検討する手段として,アンチセンスオリゴヌクレオチドによるmRNA発現調節を考えており,エクソン-イントロン境界領域でのsplicingに重要な配列を中心に有効なアンチセンスオリゴヌクレオチドを作製,検討中である.

1. To investigate the presence and frequency of 6 kinds of antibodies The correlation between frequency and age, the type and relationship of genetic anomalies are discussed. 2. The next step is to determine the presence of DMD in the DNA sequence. The next step is to determine the presence of DMD in the DNA sequence. The next step is to determine the presence of DMD in the DNA sequence. 5 cases of RF failure and RF failure That is, somatic cells are not repaired properly. 3. mRNA expression is increased. RT-PCR method to increase the amplitude of the gene, the gene alignment determination, the ready frame to correct the existence of the gene, the gene cloning mechanism to explore the possibility of the gene cloning. The cloning mechanism of the mdx tendon culture system, and in vivo in vivo in the system to maintain a variety of detection methods, such as the detection of mRNA expression regulation in the field of cloning in the important sequence of the center of the detection.