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アンチセンオリゴを用いたDuchenne型筋ジストロフィー治療への試み-revertant fiberの発現機序を応用して-

尝试使用反义寡核苷酸治疗杜氏肌营养不良症 - 应用回复纤维的表达机制 -

基本信息

批准号：
07770473
负责人：
平沢恵理
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Juntendo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.イントロン配列の決定とアンチセンスオリゴの作製mdxではエクソン23にpoint mutationが存在しこれがstop codonとなりジストロフィンが欠損している。そこでエクソン23をskipするsplicingを作らせるためのアンチセンスオリゴを決めるためエクソン23の配列をプライマーとして利用するreverse PCR法を用いイントロン23の配列を決定した。既知のアンチセンスオリゴはエクソン23へのスプライシングのacceptor siteを隠すように設計した。2. mdx筋培養系の作製とアンチセンスオリゴ処理増殖能の高い胎児筋を取りだし、grouth mediumでconfluentになるまで培養し分化誘填導の際のdexamethazoneとアンチセンスオリゴで処理した。3.培養系でのジストロフィン陽性細胞の確認ジストロフィン免疫組織化学染色による蛋白質の確認とRT-PCR法によるスプライシングの変化の確認を組み合わせて確認することにした。N末端からC末端までの異なるドメインを認識する4種類の抗ジストロフィン抗体を用いた免疫組織化学染色を行い陽性細胞の頻度からアンチセンスオリゴの効率の評価を試みたが、ジストロフン発現時期のmyotubeになると細胞が剥がれ生存が困難になり十分量の細胞が得られなかった。方法の検討が必要となり現在mdxマウスを用いたin vivoでの実験系で検討中である。

1. The decision to configure the code is incomplete. The reverse PCR method is used to determine the sequence of the gene. It is known that the design of the acceptor site of the software 23 can be changed from the original design to the original design. 2. Mdx tendon culture system operation and control of high growth potential of fetal tendon selection, grooth medium, confluent, culture, differentiation induction of dexamethazone, control, control 3. Identification of positive cells in culture lines by immunohistochemical staining, identification of proteins by RT-PCR, and identification of positive cells by RT-PCR. The frequency of positive cells stained with N-terminal and C-terminal antibodies was evaluated by immunohistochemical staining. The number of cells stained with N-terminal and C-terminal antibodies was estimated by immunostaining. The method is necessary for the study. Now mdx is used in vivo.