三次元培養系ヒト線維芽細胞を用いた光老化による真皮成分代謝の動的解析

利用三维培养人成纤维细胞动态分析光老化引起的真皮成分代谢

• 批准号: 06857054
• 负责人: 横山 洋子
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Gunma University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06857054/
• 关键词: 光老化; 三次元培養; 線維芽細胞; ムコ多糖; コラーゲン

皮膚の光老化に関する研究の多くは実験動物を用いて行われているが,我々は,線維芽細胞にin vitroで三次元構造を構築させた真皮モデルを用いた.この系を用いることにより紫外線照射によって炎症細胞が分泌するサイトカインなどの影響を受けずに紫外線の線維芽細胞への直接作用が検討できると考えられる.UVA(320〜400nm)照射では,長時間照射による細胞のコンタミネーションおよび二酸化炭素分圧の変化を防ぐためCO_2インキュベータ-を改造して使用した.UVAを1日おきに1週間(4回)照射した後,翌日細胞層を回収し細胞層のDNA量を測定したところ,照射量が1000mJ/cm^2までは照射群では非照射対照群に比べ,DNA量はほとんど変化しないが,1500mJ/cm^2では約85%,3000mJ/cm^2では約40%,6000mJ/cm^2では約15%に減少しておりUVAの強い細胞障害作用が認められた.次に細胞障害をおこさない照射条件下(500mJ/cm^2,4回)におけるUVAの直接作用を検討した.細胞層中のコラーゲン量を比較すると,照射群では非照射対照群に比べDNA量あたりの中性不溶性コラーゲン中のハイドロキシプロリン量は増加し,HPLCによる二糖分析ではムコ多糖量,とくにヒアルロン酸が増加する傾向が認められた.これらはヒトやマウスの光老化した皮膚の分析結果に一致していた.UVB(290〜320nm)については1回照射で,10mJ/cm^2まではDNA量にほとんど変化はなかったが,20mJ/cm^2では約28%に減少し,UVAよりさらに強い細胞障害作用が認められた.5mJ/cm^21回照射後に細胞層中のムコ多糖二糖をHPLCにより分析したが照射による変化は認められなかった.SDS-PAGEによるコラーゲン分析でも照射による変化は認められなかった.今年度は三次元構築をとらせた真皮モデルに対する紫外線照射の影響を検討し,照射条件の設定が終了した.今後,さらに症例数を加えるとともに,確認実験をおこなって行きたい.

The study of photoaging of skin has been carried out in many animal models. This is the first time that UVA has been used to investigate the direct effects of ultraviolet radiation on inflammatory cell secretion.(320 ~ 400nm) Irradiation, long-term irradiation of the cell temperature and carbon dioxide partial pressure change to prevent CO_2 change in the use.UVA irradiation for 1 day, 1 week (4 times), the next day cell layer returned to the cell layer DNA content determination, irradiation dose of 1000mJ/cm^2, irradiation group compared with non-irradiation group. The amount of DNA decreases by about 85% at 1500mJ/cm^2, by about 40% at 3000 mJ/cm^2, and by about 15% at 6000 mJ/cm^2, reducing UVA's strong cell-damaging effects. The direct effects of UVA were investigated under irradiation conditions (500mJ/cm^2, 4 cycles). Compared with the non-irradiated control group, the amount of DNA in the irradiated group increased, and the amount of polysaccharide in the disaccharide analysis by HPLC increased. The results of UVB analysis were consistent.(290 ~ 320nm) The amount of DNA decreased by about 28% after one irradiation,10mJ/cm^2,20mJ/cm^2. UVA analysis of UV-induced cellular damage was carried out by HPLC.SDS-PAGE analysis of UV-induced cellular damage was carried out by HPLC. This year, the effect of ultraviolet irradiation on the three-dimensional structure of the dermis was discussed, and the setting of irradiation conditions was completed. In the future, the number of cases will be increased, and it will be confirmed that the number of cases will be increased.

项目成果

Osamu Ishikawa,et al.: "Disaccharide analysis of dermal fibroblast‐derived glycosaminoglycans in the three dimensional culture." J Dermatol Sci. 8. 203-207 (1994)

Osamu Ishikawa 等人：“三维培养物中真皮成纤维细胞来源的糖胺聚糖的二糖分析。”J Dermatol Sci。8. 203-207 (1994)