三次元培養系ヒト線維芽細胞を用いた光老化による真皮成分代謝の動的解析

利用三维培养人成纤维细胞动态分析光老化引起的真皮成分代谢

• 批准号: 07857055
• 负责人: 横山 洋子
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Gunma University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07857055/
• 关键词: 線維芽細胞; 三次元培養; 老化; UVA; コラーゲン; ムコ多糖; エラスターゼ

しわ,たるみなどの皮膚の老化による外観の変化は,線維芽細胞の細胞外基質代謝の変化によると考えられる。その内的要因には暦上の加齢があり,外的要因で重要な因子には紫外線があげられる。今回は,若年者(22才,女性)と老年者(76才,男性)の皮膚組織から得られた線維芽細胞をアスコルビン酸二リン酸添加により三次元培養した。若年者の細胞は3代から7代まで,老年者の細胞は3代から6代まで継代して,内的,外的要因の影響を検討した。各代とも三次元構築をとるまで2週間培養し,その後にUVA(320〜400nm)を1日おきに1週間(4回)照射(1回あたり500mJ/cm^2,1000mJ/cm^2)し,細胞層と培養上清を回収した。細胞層中の細胞数の増加をDNA量を指標として見ると,若年者,老年者の細胞とも培養2週間後では継代が少ないものほど多かった。3週間後には,それぞれの継代でDNA量はほぼ同量になっていたが,若年者の7代と老年者の6代では他の継代数の細胞より約1-2割少なかった。また老年者の継代細胞のDNA量は若年者の細胞より3割少なかった。HPLCによるムコ多糖二糖分析ではDNA量あたりの総ムコ多糖量は若年者の細胞では継代による変化はなかったが,老年者では継代数が多くなると若干減少していた。ムコ多糖の組成は若年者の細胞より老年者でデルマタン硫酸の割合が少なく,また,それぞれの細胞とも継代数が多くなるとその割合が少しずつ減少していく傾向にあった。UVA照射によるムコ多糖量とその組成の変化は今回の実験条件では認められなかった。RT-PCRによるエラスターゼのmRNAの発現では,老年者の細胞3代より6代で減少していた。若年者およびUVA照射では発現の差は認められなかった。ELISA法によるI型コラーゲン合成活性の測定では,若年者及び老年者の線維芽細胞ともUVA照射群は非照射群より合成が低下し,若年者細胞の7代と老年者細胞の6代では他の継代に比較して低下の割合が大きかった。今後さらに継代数を増やし検討を続けて行きたい。

The changes of extracellular matrix metabolism in cell line and germ cells were examined. The inner factor is the upper factor, and the outer factor is the ultraviolet ray. Today, skin tissue from young people (22 years old, female) and elderly people (76 years old, male) has been cultured in three dimensions. If the cells of the elderly are from 3 to 7 generations, the cells of the elderly are from 3 to 6 generations, and the effects of internal and external factors are discussed. Three dimensional construction of each generation was carried out during 2 weeks of culture, followed by UVA(320 ~ 400nm) irradiation (1 cycle, 500mJ/cm^2, 1000 mJ/cm^2) for 1 day and 1 week (4 cycles), and cell layer culture supernatant was recovered. The number of cells in the cell layer increased and the DNA content increased. If the cells were cultured for 2 weeks, the number of cells in the cell layer increased and the DNA content increased. After 3 weeks, the amount of DNA in each generation is about the same as that in the seventh generation of the old generation, and the number of cells in the sixth generation of the old generation is about 1-2. The amount of DNA in the cells of the elderly is less than that of the cells of the elderly. HPLC analysis of polysaccharide content in the elderly cells The composition of polysaccharides in young and old cells tends to decrease. UVA irradiation can cause changes in the amount and composition of polysaccharides. The expression of mRNA in RT-PCR decreased in the third generation and sixth generation of cells in the elderly. If the age is too high, UVA radiation will not appear. ELISA assay showed that the synthesis activity of type I cells was lower in the UVA irradiated group than in the non-irradiated group, and the synthesis activity of type I cells was lower in the 7th generation of the young cells than in the 6th generation of the old cells. Today, the number of children is increasing.