培養エナメル芽細胞の増殖開始機序とアメロジェニン分泌開始機序の研究

培养成釉细胞增殖及釉原蛋白分泌启动机制研究

• 批准号: 07771608
• 负责人: 田畑 純
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07771608/
• 关键词: エナメル芽細胞; 無血清培地下での初代培養; アメロジェニン合成; 増殖・分化の制御; HGF; 細胞遊走化

当申請者のグループでは数年前からエナメル芽細胞の初代培養方法を無血清培地を用いて開発しつつ、その培養条件下における細胞の生理的特性や分化状態を研究している。そして、その成果のひとつとして、EGFを培地中に添加するとエナメル質形成の初期に現れるアメロジェニン陽性の細胞の割合が増えることを発見した。陽性・陰性の細胞数の計数から、EGF添加によりアメロジェニン非合成細胞がアメロジェニン合成細胞に分化したと判定でき、EGFがエナメル質形成開始に重要な役割を果たしていることが考えられた。そこで、本課題に示すとおり、このアメロジェニン合成開始機序の研究を中心にエナメル芽細胞の初代培養の系で、エナメル合成や細胞増殖を制御しうる因子を特定する作業を実験をさらに推し進めることにした。本年度は、まず細胞増殖の検定系を改善するために、Crystal Violet法、PCNA法、BrdU法を我々の系でも利用できるようにした。これらはいずれも非RIの検定系でありながら、高感度、高精度で簡便であったため、多数の試料を検定することを可能にした。そこで、上皮-間葉の相互作用において重要な働きをしていると目されている肝細胞増殖因子(Hepatocyte Growth.Factor;HGF)の初代培養エナメル芽細胞における効果を調べた。その結果(1)HGFの濃度に依存した細胞数増加がCrystal Violet法により確認された。培地中20ng/mlまでの濃度が試されたが、6ng/mlが適正濃度であった。(2)初代培養下においては、エナメル芽細胞は、遊走細胞とクラスター形成細胞の2型を示すが、HGF6ng/ml存在下では、遊走細胞の割合が増える傾向が認められた。(3)2型それぞれの分裂活性をBrdUの2時間パルスで検定したが、それぞれの分裂活性には変化がなかった。以上の結果より、HGFは、エナメル芽細胞に対して、遊走性を持たせる効果があり、遊走性のエナメル芽細胞がもともとクラスター形成細胞より増殖活性が高いことから、全体の細胞数増加につながったと考えられた。これらの結果は、歯胚の器官培養におけるHGFの効果についての研究成果とも矛盾がなく、第37回歯科基礎医学会で発表を行った。

When the applicant's cell culture began several years ago, the method of primary culture of germinal cells was developed in serum-free culture, and the physiological characteristics and differentiation status of cells were studied under the culture conditions. In addition, EGF can be found in the early stages of protein formation. The number of positive and negative cells was counted, EGF was added, non-synthetic cells were differentiated, EGF was added, and the initiation of cytoplasmic formation was determined. This paper presents the research center of synthesis initiation mechanism, and the specific operation of primary culture system, synthesis and cell proliferation control factors. This year, we have improved the identification system of cell proliferation by using Crystal Violet, PCNA and BrdU methods. This is a simple, sensitive, and accurate method for determining most samples. In primary culture, Hepatocyte growth factor (HGF) regulates the development of epithelial and mesenchymal interactions. Results: (1) Concentration dependence of HGF on cell count was confirmed by Crystal Violet method. The concentration of 20ng/ml in culture was tested and 6ng/ml was corrected. (2)In the primary culture, there was a tendency for bud cells and wandering cells to form type 2 cells. In the presence of HGF6ng/ml, there was a tendency for wandering cells to increase their cleavage. (3)2 The two types of fission activity are different. As a result, HGF and HGF increased the number of cells in the whole cell population. The results of this study are contradictory to those of the 37th Society of Basic Dental Medicine.

项目成果

Kim,Tabata et al.: "Hepatocyte growth factor participates in the morphogenesis of tooth." 73rd General Session of International Association for Dental Research. (1995)

Kim，Tabata 等人：“肝细胞生长因子参与牙齿的形态发生。”

田畑純・金健志 他: "歯胚発生におけるHGFの発現とその機能." 第37回歯科基礎医学会総会. (1995)

Jun Tabata、Kenji Kane 等人：“HGF 的表达及其在牙胚发育中的功能。”日本基础牙科医学会第 37 届大会（1995 年）。

松村達志・田畑純 他: "培養エナメル芽細胞におけるHGFレセプターの発現とHGFの影響" 第37回歯科基礎医学会総会. (1995)

Tatsushi Matsumura、Jun Tabata 等：“培养成釉细胞中 HGF 受体的表达和 HGF 的影响”，日本基础牙科医学会第 37 届全体会议（1995 年）。

Tabata et al.: "Hepatocyte growth factor is involved in the morphogenesis of tooth germ in murine molars." Development. 122(in press). (1996)

Tabata 等人：“肝细胞生长因子参与小鼠磨牙牙胚的形态发生。”

田畑純・久米川正好: "歯胚におけるHGFの発現と形態形成." 日本解剖学会第100回総会(ミニシンポジウム). (1995)

Jun Tabata 和 Masayoshi Kumekawa：“牙胚中的 HGF 表达和形态发生。”日本解剖学会第 100 届大会（小型研讨会）（1995 年）。