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耳下腺細胞における抑制性GTP結合蛋白質のリン酸化をその生理的意義

腮腺细胞抑制性GTP结合蛋白的磷酸化及其生理意义

基本信息

批准号：
07771669
负责人：
谷村明彦
金额：
$ 0.51万
依托单位：
Health Sciences University of Hokkaido
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

コラゲナーゼとヒアルロニダーゼにより調製したラット耳下腺細胞を実験に用いた.cAMP生成に対するプロテインキナーゼ阻害剤の影響フォルスコリン(10μM)刺激によるcAMP生成は、cAMP依存性プロテインキナーゼ阻害剤H8(100μM)の前処理によって約2倍に増強された.一方、百日咳毒素処理した細胞ではH8によるcAMP生成の有意な増強は認められなかった.この事から、1)リン酸化によってcAMP生成を抑制する抑制性フィードバック機構が存在する事、2)そのフィードバック機構が百日咳毒素感受性のGiを介するものである事が示唆された。ラット耳下腺細胞に存在するGiのサブタイプとリン酸化の解析耳下腺細胞から調整した細胞膜分画を用い、Gαi1,Gαi1及び2,Gαi3を認識する抗体を用いてWestern blot analisysを行なった.ラット耳下腺細胞にGαi1は全く認められず、Gαi2とGαi3の存在がそれぞれ41kb,42kbのバンドとして確認された.そこで^<32>PO_4でラベルした細胞をファルスコリンあるいはイソプロテレノール(1μM)で刺激し、Giのリン酸化を解析した.細胞質及び膜分画にいくつかのリン酸化される蛋白質が認められたが、41あるいは42kbの蛋白質のリン酸化は認められず、これらの刺激ではGiのリン酸化は起こらなかい事が示唆された.本研究からはcAMP生成を介する抑制フィードバック機構がGiのリン酸化によって起こるという証拠は見出せなかった.リン酸化によるGiの機能調節は間接的な作用と考えられる.

The cAMP production in response to stimulation by cAMP (10μ M) was enhanced by about 2-fold in response to pretreatment with cAMP dependent inhibitor H8(100μ M). A prescription, pertussis toxin treatment of cells, H8, cAMP production and intentionally enhanced recognition. 1) Inhibition of cAMP production and 2) Inhibition of pertussis toxin susceptibility by mechanisms. Western blot analysis of cellular membrane profiles, Gαi1,G α i1 and G α i2,Gαi3, and antibodies against the presence of Gi and Gi in auricular gland cells. The presence of Gαi1, Gαi2, and Gαi3 in RAG cells was confirmed to be 41kb, 42kb, and 42kb. In <32>addition, the PO_4 and Gi molecules were isolated from each other and analyzed by acid hydrolysis. Cytoplasmic and membrane analysis of protein and protein production, 41 kb protein and protein production, 42kb protein and protein production This study aims to investigate the mechanism of inhibition of cAMP production. The function of Gi is regulated indirectly by acidification.