Stable transfectionした骨及び腎細胞での24-水酸化酵素発現

稳定转染的骨和肾细胞中24-羟化酶的表达

• 批准号: 07771671
• 负责人: 明野 ながこ
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Ohu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07771671/
• 关键词: 24-水酸化酵素; クローニング; 1,25(OH)_2D_3; OK cell; Stable transfection; ビタミンD代謝; PTH

骨・腎及び小腸などで、24-水酸化酵素は活性型ビタミンDである1α,25-dihydroxyvitaminD_3[1,25(OH)_2D_3]代謝に主要な役割を演じている。1991年にラットの24-水酸化酵素遺伝子がクローニングされ、24-水酸化酵素の遺伝子発現における制御機構の解明が進んできている。代表研究者はラット24-水酸化酵素遺伝子の塩基配列をもとにoligonucleotideを作製し、マウス24-水酸化酵素のcDNAをRT-PCR法により部分クローニングした。高カルシウム血症作用のほとんどもたない活性型ビタミンDアナログ、22-oxacalcitriolが24-水酸化酵素の遺伝子発現に及ぼす影響について研究を行ったところ、このアナログは本酵素のmRNA及び活性を腎と小腸で増加させ、1,25(OH)_2D_3の分解を促進することにより、血中1,25(OH)_2Dレベルを減少されることを明らかにした(Akeno,N. et al., Biochemical Pharmacology, Vol. 48, No. 11, pp. 2081-2090, 1994)。更に、full lengthのcDNAのクローニングを行ったところ、3.2kbのcDNAが得られ、ラットとのホモロジーはアミノ酸配列で94%であった。現在、Opossum Kidney (OK) cellにマウスの24-水酸化酵素cDNAをstable transfectionさせ、24-水酸化酵素遺伝子をstableに発現するOK cellを作製している。OK cell lineは、ビタミンDreceptorや副甲状腺ホルモン(PTH)receptorを持ち、これらカルシウム調節ホルモン作用を再現し、1,25(OH)_2D_3で処理しても、24-水酸化酵素の遺伝子発現及び酵素活性の出現がみられない。(Horiuchi, N., Saikatsu, S., Akeno, N. et al., Hormone and Metabolic Research, Vol. 27, No.2, pp. 83-89, 1994)。今後、24-水酸化酵素をoverexpressした細胞とmock transfectした細胞(24-水酸化酵素が誘導されない)を用いて、1,25(OH)_2D_3で長期間処理した時の細胞の生存率、ビタミンD代謝のpatern、1,25(OH)_2D_3の分解能力について検索する。また、PTHによるビタミンD代謝の変化についても検討を加える。本研究により、細胞が1,25(OH)_2D_3過剰状態に暴露された時に、24-水酸化酵素がその生存維持にとって必須であるか否かが解明できるものと思われる。

Bone and 2D_3, 24-hydro-acidifying enzyme active enzyme (D-Acidogen) 1 α, 25-dihydroxyvitaminD_3 [1 mine25 (OH) _ 2D_3] was used as the substitute for the main cuttings. In 1991, the system of 24-hydrolyzed enzyme and 24-hydrated acidified enzyme showed that the control mechanism was in good condition. On behalf of the researchers, we selected 24-hydrated acidified enzymes (HAEs), which were linked to oligonucleotide, and HYDNAs, which were used in the cDNA-RT-PCR method. The effect of hyperglycemia was not detected in the presence of active enzyme D, the presence of 24-hydrated acidase, and the study of the activity of this enzyme mRNA and bioactive enzyme, 22-oxacalcitriol 24-hydro-acidase was detected and studied. The results showed that the bioactivity of this enzyme was enhanced by the addition of bioactive enzyme, biodegradable enzyme, bioactive enzyme, In the blood, OH 25 (OH) _ 2DZ

项目成果

Nagako Akeno: "Induction of vitamin D 24-hydroxylase messenger RNA and activity by 22-oxacalcitriol in mouse kidney and duodenum: possible role in decrease of plasma 1α, 25-dihydroxyvitaminD_3" Biochemical Pharmacology. 48. 2081-2090 (1994)

Nagako Akeno：“小鼠肾脏和十二指肠中 22-奥沙骨化三醇诱导维生素 D 24-羟化酶信使 RNA 和活性：血浆 1α, 25-二羟基维生素D_3 减少的可能作用”《生化药理学》48。2081-2090 (1994)。

Noboru Horiuchi: "Synthesis of 25-hydroxyvitaminD_3-26,23-lactone but not 24,25-dihydroxyvitaminD_3 from 25-hydroxyvitaminD_3 in opossum kidney cells treated with 1α, 25-dihydroxyvitaminD_3" Hormone and Metabolic Research. 27. 83-89 (1995)

Noboru Horiuchi：“用 1α, 25-二羟基维生素 D_3 在负鼠肾处理的细胞中从 25-羟基维生素 D_3 合成 25-羟基维生素 D_3-26,23-内酯，但不是 24,25-二羟基维生素 D_3”激素和代谢研究 27. 83-89 (1995)。 ）