破骨細胞におけるカテプシンEの局在と機能

组织蛋白酶E在破骨细胞中的定位和功能

• 批准号: 07771664
• 负责人: 筑波 隆幸
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07771664/
• 关键词: カテプシンE; アスパラギン酸プロテアーゼ; 破骨細胞; 骨吸収

破骨細胞は骨吸収において主役を担う細胞であり、通常数個から数十個の核を有する多核巨細胞である。破骨細胞は波状縁から酸(H^+)と各種加水分酵素を分泌し、骨の脱灰と有機基質の分解を行って骨吸収を進行させる。骨基質特にコラーゲンの分解には破骨細胞由来のリソゾーム性プロテアーゼ(カテプシン群)が重要な役割を果たすと考えられている。これまで筆者らはカテプシンB,D,Lが破骨細胞の波状縁部に存在し、骨吸収機構において機能分担を行っている可能性を示唆してきた。しかしカテプシンEの破骨細胞における局在や機能は全く明らかにされていない。そこで、破骨細胞に於けるカテプシンEの細胞内局在について検討した。生後5週令雄性ラット大髄骨を4%パラホルムアルデヒド、0.1%グルタールアルデヒド含有0.1Mカコジル酸バッファー(pH7.4)で4時間4度で固定し、0.3%過酸化水素水で内因性ペルオキシダーゼを除去後、ラットカテプシンE特異的ポリクローナル抗体で反応させ、さらにABCベクタステインキットにて二次抗体およびアビシン-ビオチン複合体反応による免疫染色後、DAB反応を行った。光顕用にはパラフィン包埋し、電顕用にはオスミウム固定後、脱水しエポン812で包埋後、超薄切片を作製して電顕観察した。光顕レベルでは、カテプシンEの免疫反応物は活性化破骨細胞に顕著に認められた。これに対し、近接している骨芽細胞にはカテプシンEの免疫反応物は殆ど認められなかった。電顕観察では、カテプシンEの免疫反応物はの波状縁部とそれに続く空胞様構造に偏在すること、骨面の反対側や骨面から解離した部分の細胞膜には存在しないことが示された。更にin vitroの実験からカテプシンEは酸性条件下でI型コラーゲンの対し分離能を有したことから、カテプシンEが細胞外での骨基質の分離と細胞内へ取りこまれた有機基質の分離に関与するものと推察される。

Osteoclast is a multi-nucleated giant cell with dozens of nuclei. Osteoclast cells secrete wavy acid (H^+), various water-adding enzymes, deashing of bone, and decomposition of organic matrix. The decomposition of bone matrix is an important factor in the development of osteoclasts. This paper discusses the possibility of the existence of osteoclast undulations and the function sharing of osteoclast absorption mechanism. The osteoclast cells in the brain function as a whole. The osteoclast cells are in the process of being examined. At 5 weeks of age, the male sex organs were large, 4% and 0.1% respectively, and the female sex organs contained 0.1M female sex acids.(pH7.4) 4 hours 4 degrees fixed, 0.3% peracidified water, after removal of intrinsic protein, the specific protein of ABC, secondary antibody, and the complex protein of DAB after immunostaining. After light and electricity were used for embedding, after dehydration and embedding, ultra-thin sections were prepared for electric observation. The immune response to light therapy is to activate osteoclast cells. The immune response of bone bud cells in the vicinity of the tumor was detected. The cell membrane structure of the cell membrane is not stable, and the cell membrane structure of the cell membrane is stable. In addition, in vitro, the separation of type I osteoblasts under acidic conditions can be investigated. The separation of extracellular bone matrix can be investigated.

项目成果

Yoshimine Y.et al.: "Specific immunocytochemical localization of cathepsin E at the ruffled border membrane of activeosteoclasts." Cell and Tissue Research. 281. 85-91 (1995)

Yoshimine Y.等人：“组织蛋白酶 E 在活性破骨细胞的褶皱边界膜上的特异性免疫细胞化学定位。”

Tsukuba T.et al.: "Biochemical properties of the monomeric mutant of human cathepsin E expressed in Cinese hamster ovary cells:Comparison with the wild-type and recombinant dimeric forms." The Jornal of Biochemistry. 119(in press). (1996)

Tsukuba T.等人：“中国仓鼠卵巢细胞中表达的人组织蛋白酶 E 单体突变体的生化特性：与野生型和重组二聚体形式的比较。”

Tsukuba T.et al.: "Comparison of biochemical prorerties of natural and recombinant cathepsin E.In"Aspartic Proteinases:Structure,Function,Biology,and Biomedical Implication"" (Kenji Takahashi,ed.)Plenum Press,New york, 331-334 (1995)

Tsukuba T.等人：“天冬氨酸蛋白酶：结构、功能、生物学和生物医学意义中天然和重组组织蛋白酶 E. 的生化特性比较”（Kenji Takahashi 编辑）Plenum Press，纽约，331-