アスパラギン酸プロテアーゼ活性中心をターゲットとしてデザインされた阻害剤の開発

开发针对天冬氨酸蛋白酶活性中心的抑制剂

• 批准号: 08278234
• 负责人: 木曽 良明
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Kyoto Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08278234/
• 关键词: プロテアーゼ阻害剤; アスパラギン酸プロテアーゼ; 基質遷移状態誘導体; ペプチド合成; ペプチドミミック; ウイルスプロテアーゼ; 固相合成

我々は,アスパラギン酸プロテアーゼ阻害剤の合成研究を行なってきており,高血圧において重要な役割を果たすレニンの阻害剤,エイズの原因ウイルスであるHIVプロテアーゼの阻害剤などの合成を行ない,酵素と阻害剤の結合に必要な最小阻害活性部位の探索や高い酵素阻害活性を持つ化合部(KNI-272)の合成に成功した.この成功は,酵素反応のメカニズムに着目して,酵素・基質複合体および酵素・阻害剤複合体のコンフォメーションを解析し,酵素分子活性中心の基質遷移状態のコンフォメーションを固定したミミックをデザインするという新しく論理的な方法を用いたことによるところが大きい.このような背景のもとに,この有用な方法を,細胞内およびウイルスプロテアーゼ阻害剤のデザインに応用し,基質のtransition-state analogと酵素の相互作用の解析から阻害剤を分子設計し,それに基づいてペプチドmimicを合成し,メカニズムの明確なプロテアーゼ阻害剤開発の一般的方法論確立をめざした.また本研究から,カテプシンDなどの細胞内ならびにウイルスプロテアーゼの蛋白分解反応の分子機構解明への発展を目指した.1.ウイルスプロテアーゼの合成.各ウイルスプロテアーゼの合成は我々が開発した希釈メタンスルホン酸をα-アミノ保護基切断に使用する固相合成法で,ペプチド自動合成機により行なった.また純度の高いプロテアーゼを得るためビオチン誘導体の形で精製した.2.基質の合成:基質としてプロセッシング部位の各種ペプチドを合成した.[p19/p24(Pro-Gln-Val-Leu-Pro-Val-Met-His),p24/p15(Thr-Lys-Val-Val-Gin-Pro)].3.阻害剤の合成.遷移状態誘導体の概念に基づいてプロテアーゼに特徴的な基質の切断部位Leu-ProおよびLeu-Val(P1-P1')のアミド結合をイソステリックな還元型[CH2-NH],ヒドロキシエチレン型[CHOH-CH2],ジヒドロキシエチレン型[CHOH-CHOH]等に変換し,各基質遷移状態誘導体を合成した.4.阻害活性の測定.合成したウイルスプロテアーゼ,及び合成基質を用いて酵素活性測定系を確立し,この系を用いて合成阻害剤の阻害活性を測定を行なった.

I don't know what to do, I don't know, I don't know, I don Enzyme blocking enzyme combined with essential minimum inhibitory active site to explore the successful synthesis of KNI-272 with high enzyme inhibitory activity. Successful, enzyme antisense, enzyme complex, enzyme block, enzyme complex, enzyme, enzyme The background of the experiment is sensitive, the method is useful, the intracellular DNA is used, the transition-state analog enzyme interaction is analyzed, the molecular design is analyzed, the mimic synthesis is analyzed, and the general method is established. In this study, the molecular mechanism of proteolysis and antiproteolysis was used to understand the target of the exhibition. 1. I don't know how to synthesize it. We do not want to use the method of solid-phase synthesis, the automatic synthesis machine is used to cut off the acid α-aliphatic acid in the system. I don't know if I have a good body shape. 2. Base synthesis: the synthesis of all kinds of compounds in different parts of the base. [p19/p24 (Pro-Gln-Val-Leu-Pro-Val-Met-His), p24/p15 (Thr-Lys-Val-Val-Gin-Pro)] .3. Hinder the synthesis of cymbals. The concept of "moving body" is based on the concept of "moving body", which is based on the concept of "moving body". The concept of "moving body" is based on the concept of "moving body", such as the cutting part of Leu-Pro, the Leu-Val (P1UV P1'), the combination of the two types, [CH2-NH], [CHOH-CH2] and so on. 4. The anti-damage activity was determined. The synthetic enzyme was used to determine the activity of the synthetic enzyme, and the synthetic enzyme activity was used to determine the activity of the system.

项目成果

Yun-Xing Wang: "Solution NMR Evidence That the HIV-1 Protease Catalytic Aspartyl Groups Have Different Ionization States in the Complex Formed with the Asymmetric Drug KNI-272." Biochemistry. 35-31. 9945-9950 (1996)

Yun-Xing Wang：“溶液核磁共振证据表明，HIV-1 蛋白酶催化的天冬氨酰基团在与不对称药物 KNI-272 形成的复合物中具有不同的电离态。”

Yasushi Ohno: "Solution conformations of KNI-272,a tripeptide HIV protease inhibitor designed on the basis of substrate transition state : Determined by NMRspectroscopy and simulated annealing calculations." Bioorg.Med.Chem.4・9. 1565-1572 (1996)

Yasushi Ohno：“基于底物过渡态设计的三肽 HIV 蛋白酶抑制剂 KNI-272 的溶液构象：通过 NMR 光谱和模拟退火计算确定。”1565-1572（1996）。

木曽良明: "AIDS治療薬としてのHIVプロテアーゼ阻害薬-変異ウイルスと人類の共生は可能か-." 医学のあゆみ. 177・13. 962-968 (1996)

木曾义明：“HIV蛋白酶抑制剂作为艾滋病治疗药物——人类是否有可能与突变病毒共存？”177・13（1996）。

Yoshiaki Kiso: "Design and synthesis of substrate-based peptidomimetic HIV protease inhibitors containing the hydroxymethylcarbonyl isostere." Biopolymers. 40-2. 235-244 (1996)

Yoshiaki Kiso：“设计和合成含有羟甲基羰基电子等排体的基于底物的拟肽 HIV 蛋白酶抑制剂。”

Yun-Xing Wang: "Bound water molecules at the interface between the HIV-1 protease and a potent inhibitor, KNI-272, determined by NMR." J.Am.Chem.Soc.118-49. 12287-12290 (1996)

Yun-Xing Wang：“通过 NMR 测定了 HIV-1 蛋白酶和强效抑制剂 KNI-272 之间界面上的结合水分子。”