インスリンファミリーに属する新規の神経栄養因子の単離と構造解析

インスリン受容体ファミリーに属する新規な受容体、Insulin Receptor-related Receptor(IRR)はリガンドが不明なオルファンレセプターである。その発現に関して、mRNAレベルでの報告はあるものの現在までに正常組織におけるIRRタンパク質の同定もなされていない。今回我々はラットIRRに特異的な抗体を作製し、すでにmRNAレベルでの発現を検出している前脳基底野コリン作動性ニューロンや脳幹部におけるその生理的意義を明らかにするため、タンパク質化学的かつ免疫組織化学的なアプローチを試みた。インスリン受容体ファミリー間でホモロジーの低いIRRのC末90アミノ酸を含むglutathione-S-transferase(GST)融合タンパク質を抗原として、ラットIRRに特異的な抗体を得た。この抗体を用いたWestern blotによってmRNAの最も高発現している腎臓において特異的にIRRタンパク質が初めて同定され、脳幹部においても同様の結果を得た。また、正常ラット脳に対する免疫組織化学的アプローチによって、脳幹や前脳基底野において神経細胞表面、突起に強くIRRの発現を認めた。これらの結果は、in situ hybridization法によって同定したIRRmRNA発現部位と一致していた。また、前脳基底野の神経細胞には、海馬からの逆行輸送によって供給される神経成長因子NGFの高親和性レセプターであるtrkAが共存しており、未だ同定されていないIRRリガンドが新規の神経栄養因子である可能性もある。以上の知見をふまえて、その新規インスリン様ペプチドと考えられるIRRリガンド探索を現在精力的に行っている。

インスリン受容体ファミリーに属する新規な受容体、Insulin Receptor-related Receptor(IRR)はリガンドが不明なオルファンレセプターである。その発現に関して、mRNAレベルでの報告はあるものの現在までに正常組織におけるIRRタンパク質の同定もなされていない。今回我々はラットIRRに特異的な抗体を作製し、すでにmRNAレベルでの発現を検出している前脳基底野コリン作動性ニューロンや脳幹部におけるその生理的意義を明らかにするため、タンパク質化学的かつ免疫組織化学的なアプローチを試みた。インスリン受容体ファミリー間でホモロジーの低いIRRのC末90アミノ酸を含むglutathione-S-transferase(GST)融合タンパク質を抗原として、ラットIRRに特異的な抗体を得た。この抗体を用いたWestern blotによってmRNAの最も高発現している腎臓において特異的にIRRタンパク質が初めて同定され、脳幹部においても同様の結果を得た。また、正常ラット脳に対する免疫組織化学的アプローチによって、脳幹や前脳基底野において神経細胞表面、突起に強くIRRの発現を認めた。これらの結果は、in situ hybridization法によって同定したIRRmRNA発現部位と一致していた。また、前脳基底野の神経細胞には、海馬からの逆行輸送によって供給される神経成長因子NGFの高親和性レセプターであるtrkAが共存しており、未だ同定されていないIRRリガンドが新規の神経栄養因子である可能性もある。以上の知見をふまえて、その新規インスリン様ペプチドと考えられるIRRリガンド探索を現在精力的に行っている。