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mRNAスプライシング制御におけるインスリン受容体基質の新機能解明の試み

尝试阐明胰岛素受体底物调节mRNA剪接的新功能

基本信息

批准号：
20658065
负责人：
高橋伸一郎
金额：
$ 2.18万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

申請者らは、インスリンやインスリン様成長因子(IGF)のシグナルを仲介するインスリン受容体基質(IRS)のmRNAスプライシング制御における新機能の解明を目的に研究を行った。その結果、1.293細胞やMCF7乳ガン細胞の抽出液をRNaseで処理し、IRSを含む複合体の大きさをスクロース密度分画法などで解析した結果、RNase処理によって複合体の大きさが減少したことから、これらの細胞内でIRSがRNAと複合体を形成していることがわかった。2.IRSと結合するRNAを特定するため、IRS-1を293細胞に発現し、相互作用するRNAをcross-linking immunoprecipitation(CLIP)法によって解析した結果、約40種のmRNA、スプライソソームを構成するU2snRNA、およびU6snRNAの同定に成功した。同定されたmRNAの一部はイントロン配列でIRSと結合することから、未成熟RNAとしてIRSと相互作用していると考えられた。3.IRS-1/2は細胞質に存在することが知られているが、免疫染色法による解析の結果、MCF7乳ガン細胞において一部は核内にも存在し、特にスペックル状の構造に集積していることがわかった。4.IRS-1を293細胞に過剰発現し、同定されたIRS-1結合性mRNAをPCR法で増幅した結果、一部のmRNAはIRS-1の過剰発現によって未成熟型RNAが増加したことから、IRS-1がmRNAスプライシングを抑制すると考えられた。一連の解析から、核内における未成熟mRNAのスプライシング制御というIRSの新機能を示すことに成功した。

The applicant has been conducting research on the elucidation of novel functions of mRNA expression systems of receptor matrix (IRS) in the regulation of IGF expression systems. The results of RNase treatment of extracts from 1.293 cells and MCF7 cells showed that IRS RNA complexes were reduced in size by RNase treatment, and IRS RNA complexes were formed in cells. 2. IRS RNA binding specificity analysis, IRS-1 RNA cross-linking immunoprecipitation(CLIP) analysis results, about 40 kinds of mRNA, protein composition, U2snRNA, U6snRNA identification success. Part of the mRNA sequence is related to IRS binding, immature RNA interaction, and so on. 3. IRS-1/2 cell cytoplasm exists, immunostaining analysis results, MCF-7 breast cells in a part of the nuclear structure exists, especially in the collection of complex structures. 4. IRS-1 mRNA expression in 293 cells increased by PCR, and IRS-1 mRNA expression increased by PCR, and IRS-1 mRNA expression decreased by PCR. The new function of IRS was successfully demonstrated by the analysis of immature mRNA in the nucleus.