mRNAスプライシング制御におけるインスリン受容体基質の新機能解明の試み

尝试阐明胰岛素受体底物调节mRNA剪接的新功能

• 批准号: 20658065
• 负责人: 高橋 伸一郎
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20658065/
• 关键词: インスリン受容体基質(IRS); RNAスプライシング; インスリン; インスリン様成長因子(IGF); RNA結合タンパク質; cross-linking immunoprecipitation (CLIP); インスリン様成長因子; RNA; RNA結合蛋白質; CLIP(cross-linking and immunoprecipitation)法; mRNA; non-coding RNA

申請者らは、インスリンやインスリン様成長因子(IGF)のシグナルを仲介するインスリン受容体基質(IRS)のmRNAスプライシング制御における新機能の解明を目的に研究を行った。その結果、1.293細胞やMCF7乳ガン細胞の抽出液をRNaseで処理し、IRSを含む複合体の大きさをスクロース密度分画法などで解析した結果、RNase処理によって複合体の大きさが減少したことから、これらの細胞内でIRSがRNAと複合体を形成していることがわかった。2.IRSと結合するRNAを特定するため、IRS-1を293細胞に発現し、相互作用するRNAをcross-linking immunoprecipitation(CLIP)法によって解析した結果、約40種のmRNA、スプライソソームを構成するU2snRNA、およびU6snRNAの同定に成功した。同定されたmRNAの一部はイントロン配列でIRSと結合することから、未成熟RNAとしてIRSと相互作用していると考えられた。3.IRS-1/2は細胞質に存在することが知られているが、免疫染色法による解析の結果、MCF7乳ガン細胞において一部は核内にも存在し、特にスペックル状の構造に集積していることがわかった。4.IRS-1を293細胞に過剰発現し、同定されたIRS-1結合性mRNAをPCR法で増幅した結果、一部のmRNAはIRS-1の過剰発現によって未成熟型RNAが増加したことから、IRS-1がmRNAスプライシングを抑制すると考えられた。一連の解析から、核内における未成熟mRNAのスプライシング制御というIRSの新機能を示すことに成功した。

Applicants ら は, イ ン ス リ ン や イ ン ス リ ン others in growth factor (IGF) の シ グ ナ ル を placement す る イ ン ス リ ン substrate (IRS) by let body の mRNA ス プ ラ イ シ ン グ suppression に お け る new function の interpret を purpose に を line っ た. そ の results, 1.293 cell や MCF7 milk ガ ン cells の extract を RNase で 処 し, IRS を composite containing む の big き さ を ス ク ロ ー ス density points illustration な ど で parsing し た results, RNase 処 Richard に よ っ て complex の big き さ が reduce し た こ と か ら, こ れ ら の で が RNA と complex を IRS form in the cell Become て て る とがわ とがわ った った. 2.IRSと binds to するRNAを specific するため, IRS-1を293 cells に exhibit する, and interact with するRNAをcross-linking Immunoprecipitation method (CLIP) に よ っ て parsing し た results, about 40 kinds of の mRNA, ス プ ラ イ ソ ソ ー ム を constitute す る U2snRNA, お よ び U6snRNA の with fixed に successful し た. With fixed さ れ た mRNA の a は イ ン ト ロ ン match column で IRS と combining す る こ と か ら, immature RNA と し て IRS と interaction し て い る と exam え ら れ た. 3. The IRS - 1/2 は cytoplasm に exist す る こ と が know ら れ て い る が, immune staining に よ る analytical の results, MCF7 milk ガ ン cells に お い て within a は nuclear に も exist し, に ス ペ ッ ク ル shape の constructing に set product し て い る こ と が わ か っ た. を 4. The IRS - 1 293 cells に turning 発 し, now be さ れ た associativity IRS - 1 mRNA を PCR method of で raised し た results, a の mRNA は の IRS - 1 before turning 発 now に よ っ て immature RNA が raised add し た こ と か ら が, IRS - 1 mRNA ス プ ラ イ シ ン グ を inhibit す る と exam え ら れ た. For の parsing か ら, nuclear に お け る immature mRNA の ス プ ラ イ シ ン グ suppression と い う IRS の new function を shown す こ と に successful し た.

项目成果

Insulin receptor substrates (IRSs)from a high-molecular-mass complex containing RNAs as well as proteins that function in RNA aprocessing

胰岛素受体底物 (IRS)，来自含有 RNA 以及在 RNA 加工中起作用的蛋白质的高分子质量复合物

• 发表时间: 2009
• 作者: 尾添淳文;ら;Meri Sone
• 通讯作者: Meri Sone

Insulin receptor substrates(IRSs)form a complex with RNA

胰岛素受体底物 (IRS) 与 RNA 形成复合物

• 发表时间: 2009
• 作者: 尾添淳文;ら
• 通讯作者: ら

炎症・再生医学事典(掲載確定)

炎症与再生医学百科全书（已确认出版）

• 发表时间: 2009
• 作者: 尾添淳文;ら;Meri Sone;高橋伸一郎
• 通讯作者: 高橋伸一郎

発達と成長を司るホルモン、インスリン様成長因子

胰岛素样生长因子，一种控制发育和生长的激素

• 发表时间: 2010
• 期刊: 日本未熟児新生児学会誌 22
• 作者: 高橋伸一郎;ら
• 通讯作者: ら

成長ホルモン、インスリン様成長因子、インスリンの代謝活性の連携

生长激素、类胰岛素生长因子和胰岛素代谢活性的协同作用

• 发表时间: 2009
• 期刊: ホルモンと臨床 57
• 作者: 高橋伸一郎;ら
• 通讯作者: ら