肝小胞体グルクロン酸抱合化における糖ヌクレオチドの膜透過反応の再構成

肝内质网葡萄糖醛酸化过程中糖核苷酸膜渗透反应的重建

• 批准号: 07780544
• 负责人: 生城 真一
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Himeji Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07780544/
• 关键词: グルクロン酸抱合反応; 糖ヌクレオチド; ラット肝小胞体膜; リポソーム再構成; 膜透過機構

本申請者は、肝細胞における薬物代謝に関わるグルクロン酸抱合反応での糖ヌクレオチドの小胞体膜透過の分子機構の解明を一貫して行っている。昨年度までに迅速ろ過法を用いたUDP-グルクロン酸の膜透過活性測定系を確立し、ラット肝ミクロソーム画分を用いてUDP-グルクロン酸の膜透過反応について解析を行ってきた。本申請においては、この糖ヌクレオチドの膜透過機構を分子レベルで解明するために膜透過に関与するトランスポータタンパク質を精製することを目的として、人工膜リポソームを用いたUDP-グルクロン酸の膜透過活性の再構成実験を試みてきた。再構成法には多くのトランスポーターで用いられている凍結-融解法を適用し、ラット肝ミクロソームの可溶化標品でのUDP-グルクロン酸の輸送活性(小胞内への取り込み活性)の測定を行い、その結果より以下のことが明らかにされた。(1)トランスポータ精製においてUDP-グルクロン酸の膜透過活性とUDP-グルクロン酸転移酵素(UGT1)が精製過程で同じ挙動を示す。(2)UDP-グルクロン酸転移酵素の種々の誘導剤(フェノバルビタールやメチルコラントレン)により処理したラット肝より調製したミクロソーム画分の膜透過活性が上昇する。(3)ミクロソーム標品をSH基の修飾剤であるN-エチルマレイミドで処理することにより膜透過活性が抑制されると同時にグルクロン酸抱合化活性も阻害を受ける。このように従来の仮説であるUDP-グルクロン酸の膜透過に関与するタンパク質の存在が否定される結果となり、UDP-グルクロン酸転移酵素自身がグルクロン酸抱合化機能とともにUDP-グルクロン酸のトランスポート機能を併せもつのではないかという可能性が示された。

The applicant is responsible for the metabolism of substances in liver cells, including acid conjugation and reaction. The molecular structure of sugar can be penetrated through the small cell body membrane. Last year, the rapid pass method was established using the UDP-グルクロン acid membrane permeation activity measurement system, Rado Liver ミクロソームdrawing points をUsing いてUDP-グルクロン acid membrane through the reaction について analysis を行ってきた. This application is based on the molecular structure of the membrane permeation mechanism of the sugar filter. The ベルで明するために film passes through the に关 and the するトランスポータタンパThe クquality を refined することをpurpose として, the artificial membrane リポソームを is reconstituted with the いたUDP-グルクロン acid の membrane permeable active の娓をtrial みてきた. Reconstruction method: には多くのトランスポーターで Use いられている to freeze -The melting method is suitable for use, and the solubilized standard product of Rado Liver The UDP-グルクロン acid transport activity (intracellular intracellular activity) was measured in a row, and the results were measured below. (1) Toroランスポータ Refined UDP-グルクロンacid membrane permeable active material The refining process of UDP-グルクロン acid translocation enzyme (UGT1) is the same as shown below. (2) UDP-グルクロンacid transfer enzyme ののinducing agent (フェノバルビタールやメチルコラントレン) により treatment したラット liver より modulation したミクロソームdrawing points の membrane permeability が rise する. (3) Standard product of ミクロソームSH base modified であるN-エチルマレイミドでprocessed するこThe transmembrane permeability activity is inhibited and the acid conjugation activity of the tetrafluoroethylene membrane is inhibited and affected.このように従来の仮说であるUDP-グルクロン acid のmembrane passes through に关与するタンパク性のnegativeされるRESULTとなり、UDP-グルクロン黢The transfer enzyme itself has the function of conjugating glucosamine acid into UDP-glucoside acid. The function of the トランスポートを和せもつのではないかというpossibility is shown in the された.