組み換えレトロウイルス標識法による小脳バーグマングリアの起源の解析

使用重组逆转录病毒标记分析小脑伯格曼胶质细胞的起源

• 批准号: 07780685
• 负责人: 森田 規之
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Kyoto Prefectural University of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07780685/
• 关键词: 組み換えレトロウイルス; バーグマングリア; 小脳; S-100β; プロモーター活性; グルココルチコイド受容体; 細胞起源; マウス

バーグマングリアの分化過程を、S-100β遺伝子プロモーター活性の可視化によって追跡するために以下の検討を行った。分与されたマウスS-100β遺伝子の5′上流領域からプロモーター領域の欠失系列を作製し、これらをプロモーターアッセイのためのレトロウイルスベクタープラスミドであるpIP300plusにサブクローニングした。同種指向性パッケージング細胞Ψ2にトランスフェクトしてウイルス産生細胞株を樹立し、細胞培養上清から組み換えレトロウイルスを調製した。プロモーター活性の可視化のために効率の高いプロモーター領域を、S-100βを常時発現する株化細胞ラットC6グリオーマを標的として検索を試みた。しかしながらプロモーター可視化の効率が極めて低く解析に困難を伴ったことから、プラスミドの再構築、パッケージング細胞への遺伝子導入方法の変更等を行い、最終的に異種指向性のパッケージング細胞PA317を用いて組み換えウイルスを調製して、解析を可能とした。現在、明らかとなったプロモーター領域の活性を初代培養バ-クマングリアおよび小脳培養スライスで解析中である。さらに、マウス成獣の小脳において、バーグマングリアがグルココルチコイド受容体免疫陽性であることを見いだした。用いた抗血清はラットグルココルチコイド受容体cDNAからGST-fusion法によって調製した抗原蛋白質に対するものである。この抗原はグルココルチコイド受容体の転写調節ドメインの一部、マウス配列と92%のホモロジーを有する領域である。イムノブロット解析からマウスにおいても単一のバンドを与え、また、胎生14日の小脳原基において既に発現していることを明らかにした。今後、バーグマングリアの起源、分化との関連性を分子形態学的に追求する。

The differentiation process of S-100β gene was studied in the following ways: visualization of S-100β gene activity; The 5′ upstream domain of the S-100 beta derivative is controlled by the domain loss system. The domain loss system is controlled by the domain loss system. Homotropic cell lines were established and cell culture supernatants were prepared. High efficiency of visualization of cell activity, S-100 beta, constant occurrence of cell activity, and detection of cell activity. The efficiency of visualization is extremely low, and the difficulty of reconstruction and analysis is very low. The method of gene introduction into cells is also improved. Finally, the heterogeneous directivity of PA317 cells is modulated and analyzed. Now, the activity in the field of primary culture is analyzed. In addition, it is necessary to establish a system for the prevention and treatment of diseases. Antisera were used to modulate antigen proteins by GST-fusion method. This antigen is part of the receptor's regulatory framework and 92% of the receptor's regulatory framework. The 14th day of the birth of a baby is the first day of its life. In the future, the origin, differentiation and relationship of molecular morphology will be pursued.