Isolierung von Phytochromobilin-Synthase-Genen zur Synthese des Phytochrom-Chromophors in E.coli

分离用于在大肠杆菌中合成光敏色素发色团的光敏色素合酶基因

• 批准号: 5273374
• 负责人: Professor Dr. Jonathan Hughes, Ph.D.
• 金额: --
• 依托单位: Institut für Pflanzenphysiologie
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 1999-12-31 至 2005-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5273374?language=en
• 关键词: Isolierung; von; Phytochromobilin; Synthase; Genen

Phytochrome sind photochrome Photorezeptoren mit Bilin-Chromophoren, die u.a. in Pflanzen und Cyanobacterien vorkommen. Das cyanobacterielle Phytochromgen aus Synechocystis (Cph1) läßt sich als Apoprotein hervorragend in E.coli exprimieren. In diesem Projekt soll die Synthese des Phytochrom-Chromophors in E.coli und damit die gesamte Synthese von Holophytochrom in coli ermöglicht werden. Dies würde zahlreiche experimentelle Möglichkeiten mit sich bringen. Überexpression von Häm-Oxygenase (HO) in E.coli führt zur Synthese von Biliverdin (BV) aus Häm. Der Schritt von BV zu Phytochromobilin (PfB) wird von Phytochromobilin-Synthase (PfBS) Cph1 werden zunächst zusammen in E.coli exprimiert (HO-Cphl-coli), wobei Cph1 dem Nachweis der PfBS-Aktivität dient; Holophytochrom+-Kolonien werden photochrom und sind daher leicht nachzuweisen. Effiziente Methoden werden für diesen Zweck entwickelt. Im ersten Ansatz werden definierte Sequenzen aus Synechocystis verwendet, wobei fünfzehn Gene mit noch unbekannter Funktion, die gemeinsam mit Genen des Tetrapyrrol-Stoffwechsels polycistronisch arrangiert vorliegen, getestet werden. In einem weiteren Ansatz werden pflanzliche cDNA-Expressionsbanken nach PfBS-Aktivitäten gescreent. Proteinbiochemische Methoden bieten eine dritte Möglichkeit, PfBS zu klonieren.

光敏色素是一种光致变色剂，在美国有胆色素-发色团。in Pflanzen和Cyanobacterien蓝藻vorkommen vorkommen.集胞藻的藻色素（Cph 1）在大肠杆菌中表现为脱辅基蛋白。在这个项目中，大肠杆菌中光敏色素-发色团的合成和大肠杆菌中全光敏色素的合成韦尔登。这将是一个实验性的Möglichkeiten它带来了。Häm-Oxygenase（HO）在大肠杆菌中的过表达，用于合成胆绿素（BV）。BV与植物色素移动素（PfB）的结合可使植物色素移动素合酶（PfBS）Cph 1在大肠杆菌中表达，而Cph 1则与PfBS活性成分的结合;全植物色素+-Kolonien可使光致变色，并可使其发光。Effiziente Methoden韦尔登für diesen Zweck entwickelt.首先对集胞藻进行韦尔登测序，发现具有更强功能的基因与四吡咯-Stoffwechsels多克隆基因共同作用，得到韦尔登。在另一个安东韦尔登，PfBS激活的cDNA表达库已经建立。蛋白质生物化学方法需要一种干燥的Möglichkeit，PfBS zu klonieren。