コメのプロテインホスファターゼのクローニングとその情報伝達因子としての機能の解析

水稻蛋白磷酸酶的克隆及其信号转导因子功能分析

• 批准号: 07760134
• 负责人: 渡邉 寛人
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07760134/
• 关键词: イネ; プロテインホスファターゼ

本研究は、植物のプロテインホスファターゼ2Aについて、イネにおける存在形態、遺伝子発現調節機構、酵素学的性質等を明らかにすることにより、植物の情報伝達機構の一端を解明し、植物生理学および基礎農学に貢献することを目的として行った。登熟期イネ種子より単離し、一次構造を決定した4種類のプロテインホスファターゼ2A (PP2A)の触媒サブユニットのmRNAの種子登熟および発芽過程における発現状態をノーザン分析によりしらべたところ、各時期を通じて構成的に発現していることが明らかとなった。mRNAの発現に対し、各種植物ホルモンの効果は見られなかった。次に、cDNAクローンを用いて、組換えタンパク質を大腸菌内で大量発現させることに成功し、これを用いてポリクローナル抗体を作製した。種子薄切片をこの抗体を用いて染色したところ、種子の広い範囲にPP2Aタンパク質が存在していることが明らかとなった。これらのことはPP2Aが種子において普遍的に重要な機能を担っていることを示唆するものであると考えられる。さらに、イネ種子より各種クロマトグラフィーによりPP2Aタンパク質を部分精製した。その結果、動物由来のPP2Aとよく似た性質をもつPP2Aが植物種子にも存在することが明らかとなった。また、イネ種子のジベレリン誘導性システインプロテイナーゼであるオリザインαおよびβ遺伝子のプロモーターとβ-グルクロニターゼ(GUS)との融合遺伝子を作製した。導入したプロトプラストにおけるGUS活性の変動を、PP2A阻害剤であるオカダ酸を作用させて分析することにより、オリザインのジベレリン応答機構におけるPP2Aの役割について検討できると考えられる。

This study aims to clarify the existence, morphology, genetic regulation mechanism and enzymatic properties of plant information transmission mechanism, and the contribution of plant physiology to basic agronomy. The seed maturation period is determined by the primary structure of the four types of seed maturation and germination, and the catalyst of PP2A (PP2A) is used to analyze the seed maturation and germination process of the mRNA. The expression of mRNA is related to the growth of various plants. In addition, the cDNA library was used to construct a large number of proteins in E. coli. The seed thin section is stained with antibodies, and the seed is stained with PP2A. This is the first time I've ever seen a child. All kinds of seeds are refined. PP2A and PP2A are the results of animal origin and the nature of plant seed. The gene expression pattern of the seed is induced by the gene expression pattern of the β-gene. GUS activity changes, PP2A inhibitor changes, PP2A changes, PP2

项目成果

Tomiko Asakura: "Rice aspartic proteinase, oryzasin, expressed during seed ripening and germination, has a gene organization distinct. from those of animal and microbial aspartic proteinases" Eur. J. Biochem.232. 77-83 (1995)

Tomiko Asakura：“水稻天冬氨酸蛋白酶，oryzasin，在种子成熟和发芽过程中表达，具有与动物和微生物天冬氨酸蛋白酶不同的基因组织”Eur。

Chieko Domoto: "Isoslation and characterzation of two distinct cDNA clones encoding corn seed cysteine proteinases." Biochim. Biophys. Acta. 1263. 241-244 (1995)

Chieko Domoto：“编码玉米种子半胱氨酸蛋白酶的两个不同 cDNA 克隆的分离和表征。”