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Analysis on protein phosphatases that regulate turnover of ethylene biosynthesis ACC synthase

调节乙烯生物合成 ACC 合酶周转的蛋白磷酸酶分析

基本信息

批准号：
21H02185
负责人：
森仁志
金额：
$ 11.15万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

トマトACC合成酵素(SlACS)を脱リン酸するprotein phosphatase PP2Aを同定する予定だった。特にその中で脱リン酸する基質を決めるPP2AのBサブユニットを同定する必要がある。これまでのアラビドプシスの解析から、Bサブユニットの中でも、B”サブユニットグループが候補となった。ここで本来の目的であるトマトのPP2Aに材料を変えた。B”サブユニットグループ内に5つのサブユニットがあり、どのサブユニットが結合するか明らかにする必要があった。これらのB”サブユニットcDNAをクローニングした。以前にyeast two hybrid systemで相互作用の検出を試みたが、うまくいかなかったのでACC合成酵素のタンパク質間相互作用を明らかにするために、AlphaScreen法で解析した。トマトSlACS2のC末端にはFlagアミノ酸配列を付加し、B”サブユニットタンパク質のN末端にmycアミノ酸配列を付加した。両タンパク質ともに小麦胚芽無細胞タンパク質合成系で合成し相互作用を解析したが、タンパク質間相互作用を明らかにすることができなかった。数年、ほとんど進展できていない。基本的にAlphaScreen法でタンパク質間相互作用を明らかにするために必要なタンパク質量が少ないのか、条件が適正でないのか依然として課題は残る。AlphaScreen法の場合、SlACS2をリン酸化状態でBサブユニットと反応させていない点が重大な問題である。元々PP2Aはリン酸化タンパク質を相手にするので、SlACS2をリン酸化酵素CDPKでリン酸化する、あるいはSlACS2のリン酸化されるセリン残基をアスパラギン酸残基に変換して擬リン酸化状態にして、タンパク質間相互作用を解析するという戦略を取ったが、こちらも成果が出ていない。残り一年間でこれらの点を解決しないといけない。

ACC synthase PP2A In particular, it is necessary to determine the substrate of PP2A and B. This is the first time I've ever seen a woman who's had sex with a child. The original purpose of PP2A is to make it work. B "これらのB”サブユニットcDNAをクローニングした。In the past, the interaction between two hybrid systems was analyzed by AlphaScreen method. Flag-free acid alignment at the C-terminal of SLS 2 The interaction between wheat germ cell-free plasma-free synthesis system and plasma-free synthesis system is analyzed. Years of progress. The basic AlphaScreen method is to clarify the mass-to-mass interaction, to determine the necessary mass, to determine the appropriate conditions, and to determine the problem. AlphaScreen method in case, SlACS2, acid state, B, C, D, C, D, D, E, E, The protein PP2A is a protein that can be acidified by the enzyme CDPK, SlACS2, and SlACS2. The protein PP2A is a protein that can be acidified by the enzyme CDPK, SlACS2, and SlACS2 by the enzyme CDPK. A year later, the problem was solved.

项目成果

期刊论文数量（5）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

質量分析計を用いたアサガオのFTタンパク質の検出・定量

使用质谱仪检测和定量牵牛花 FT 蛋白

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
Tanahara Yoshiki;Yamanaka Kaho;Kawai Kentaro;Ando Yukiko;Nakatsuka Takashi;山下瑠花・藤木卓巳・堀川謙太郎・春日純・上野敬司・実山豊・鈴木卓;森　仁志
通讯作者：
森　仁志

Heteromeric interactions of ripening-related ethylene receptors in tomato fruit