魚類精子形成の制御機構に関する分子・細胞学的研究

鱼类精子发生调控机制的分子和细胞学研究

• 批准号: 07760174
• 负责人: 三浦 猛
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07760174/
• 关键词: 精子形成; ニホンウナギ; アクチビンB; 生体外培養

本研究はニホンウナギを実験材料として、精子形成開始の制御機構を解明する目的で行われた。ウナギの精子形成の開始に拘わる因子は、ヒト絨毛性生殖腺刺激ホルモン(HCG)の投与によって精巣での発現が誘導あるいは消失する可能性が高い。そこでHCG投与によって精巣での発現が消長する遺伝子のクローニングをcDNAサブトラクションの手法を用いて行った。その結果、2種類のHCG投与によって発現が誘導されるcDNAクローン(HCG誘導クローン)と、6種類のHCG投与により発現が消失するcDNAクローン(HCG制御クローン)を得ることに成功した。これらのうちHCG誘導クローンの一つの全塩基配列を決定したところ、その予想されるアミノ酸配列より、このクローンはアクチビンβ_Bサブユニットであることが明らかとなった。このアクチビンβ_BサブユニットのmRNA、およびこのサブユニットのホモダイマーであるアクチビンBタンパクの発現を詳しく解析したところ、このタンパクとmRNAは生殖腺刺激ホルモンによって産生が制御されている精子形成誘起ステロイド:11-ケトテストステロン(11-KT)の刺激によりセルトリ細胞で特異的に発現することが明らかとなった。これらの結果より、ウナギアクチビンBは、精子形成開始に直接拘わる因子である可能性が出てきた。そこで、上述のウナギアクチビンβ_BサブユニットcDNAよりウナギアクチビンBの組換体タンパクを作製し、この組換体タンパクに精子形成誘起能があるか否かを、生体外培養系により確かめた。ウナギアクチビンβ_BサブユニットcDNAを含む発現用ベクターを導入したCHO細胞より単離精製した組換体タンパクを精巣器官培養に添加したところ、培養精巣片中の精原細胞は増殖を開始した。この結果より、ウナギでは、アクチビンBが11-KTによって制御される精子形成誘起因子であることが、ほぼ確定的となった

The aim of this study is to elucidate the mechanisms that control the initiation of spermatogenesis. There is a high likelihood that factors that inhibit the initiation of spermatogenesis, such as chorionic gonad stimulation (HCG), are involved in the induction of spermatogenesis, or disappear. This allows for the precise development of genetic code in HCG delivery through the use of cDNA support mechanisms. The results showed that 2 kinds of HCG administration and detection were induced by cDNA, 6 kinds of HCG administration and detection were disappeared by cDNA. The total base alignment of HCG induction is determined by the acid alignment, the HCG induction and the β_B induction. The expression of mRNA, mRNA and mRNA in gonad stimulation was analyzed in detail. The expression of mRNA in gonad stimulation was analyzed in detail. The result of this is that the sperm formation starts directly with the factor of the possibility of the sperm formation. In addition, the above-mentioned cDNA can be used to control sperm formation induction in vitro culture systems. It is necessary to introduce the cDNA into CHO cells, purify the cells, add the cDNA to the sperm culture, and start the proliferation of spermatogonia in the sperm culture. The result of this is that the sperm formation inducing factor is determined by the number of sperm formation inducing factors in 11-KT.