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アストロサイトが産生する脳毛細血管の分化を促す液性因子の分子クローニング

星形胶质细胞产生的促进脑毛细血管分化的体液因子的分子克隆

基本信息

批准号：
07770026
负责人：
桜井武
金额：
$ 0.64万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770026/
关键词：
脳毛細血管内皮細胞アストロサイトタイトジャンクション

项目摘要

脳毛細血管の内皮細胞には、他の血管内皮細胞と比べ、著しい特徴が備わっている。その内、きわめて発達したタイトジャンクションの存在は、血液・脳関門の機能を、細胞レベルで荷うものであるが、培養条件下においては、その存在を認めることは、困難である。当該年度においては、脳毛細血管内皮細胞の初代培養法と、タイトジャンクションの生成を簡便に測定できるアッセイ法の確立を行い、将来的に内皮細胞にタイトジャンクションの形成を促す因子の単離を目的としている。成熟ラット大脳より、酵素処理およびパーコール密度勾配により、毛細血管を分離し、さらに内皮を分離した。PDGFを含まない血清を用いて数代継代培養を行うことにより、ペリサイトをとりのぞき、ほぼ純粋な脳毛細血管内皮細胞を得た。この細胞を多孔性の膜上に生着させ、その上下間の電気抵抗を測定することにより、タイトジャンクションの形成をアッセイした。また、内皮細胞のγ-GTP活性も分化の指標として測定した。このアッセイ系を用いて、アストロサイトの培養上清中に、脳内皮細胞のタイトジャンクション形成を促し、γ-GTP活性を上昇させる活性を見出した。しかし、この活性の存在は、アストロサイトの徴妙な培養条件によって左右され、この活性を精製するのは現段階では困難である。現在、アストロサイトの最適な培養条件、脳抽出液から直接精製する方法等を検討している。

The characteristics of capillary endothelial cells are different from those of other vascular endothelial cells. The existence of the system, the function of the blood system, the function of the cell system, the existence of the system under culture conditions, and the difficulty. In this year, the primary culture method of capillary endothelial cells and the generation of cell culture medium were used to determine the establishment of cell culture medium and the generation of cell culture medium in the future. Mature, enzyme treatment, density matching, capillary separation, endothelial separation PDGF contains serum and is cultured for several generations. The cellular membrane is porous, and the electrical resistance between the upper and lower layers is measured. Measurement of γ-GTP activity and differentiation index of endothelial cells The activity of γ-GTP was also found in the supernatant of cultured endothelial cells, which was stimulated by the use of γ-GTP. It is difficult to refine the activity of the enzyme in the present stage due to the existence of the enzyme and its characteristics. Now, the optimum culture conditions of the extract and the method of direct purification are discussed.