血小板活性化因子合成酵素の活性化機構の解析

血小板激活因子合酶激活机制分析

• 批准号: 07770100
• 负责人: 粂 和彦
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770100/
• 关键词: 血小板活性化因子; アセチル転移酵素; マクロファージ; リポポリサッカライド

今年度の研究計画に沿った研究の結果、以下の結果を得た。1.血小板活性化因子(PAF)合成酵素の活性化機構の解析マウスマクロファージ系細胞株、RAW264.7を用いて、血小板活性化因子合成酵素(アセチル-CoA:リゾ血小板活性化因子アセチル転移酵素)の活性調整機構を検討した。この細胞株では、PAFそのもの、および、LPS(エンドトキシン)で、この酵素が活性化されたが、PAFによる活性化は、投与後1-2分をピークとして、5分後には、基底状態まで戻るのに対して、LPSによる活性化は15分程度をピークとし、その後も持続するようなパターンを示した。また、カルシウムイオノフォア(A23187)もほぼPAFと同様の時間経過で、この酵素活性を活性化すること、および細胞内カルシウム濃度の増加を阻害する、BAPTAにより、PAFによる活性化が阻害されたことより、PAFは細胞内カルシウム濃度の上昇により、この酵素を活性化していると考えられた。現在この結果は投稿準備中である。2.PAF合成酵素cDNAクローニング今年度は、準備段階として、PAF合成酵素活性をもたないホスト細胞の検索を行った。その結果、一過性発現によく使用されるCOS細胞は、強いPAF合成酵素活性をもつことがわかり、スクリーニングには不適であることがわかった。逆にCHO細胞は、ほとんどこの酵素活性を持たず、使用可能なことが示されたので、CHO細胞を用いた一過性発現の最適化を行い、リポフェクション法により、高い発現を得られる条件を見いだした。今後、ライブラリーのスクリーニングを開始する予定である。

This year's research project was conducted along with the results of the study. The following results were obtained. 1. Analysis of the Activation Mechanism of Platelet Activating Factor (PAF) Synthetase in Cell Line RAW264.7 and Study of the Activation Regulation Mechanism of Platelet Activating Factor Synthetase The cell lines showed the activity of PAF, PAF, LPS, PAF, LPS, PAF, PAF PAF (A23187): PAF isoforms over time, enzyme activity, inhibition of increase in intracellular concentrations, PAF activation, inhibition of PAF isoforms, PAF increase in intracellular concentrations, enzyme activity, inhibition of PAF isoforms. Now the results are ready for submission. 2. PAF synthase cDNA sequencing is carried out at different stages of preparation, and PAF synthase activity is also carried out at different stages of cell development. The results, transient occurrence, and use of COS cells, strong PAF synthase activity, and discomfort In contrast, CHO cells have high enzyme activity, high activity, and high activity. From now on, the price of the car will be fixed.